膵β細胞に関わる転写因子の網羅的検索-プロテオミックスの手法を用いて-

全面寻找胰腺β细胞相关转录因子——利用蛋白质组学方法——

• 批准号: 17659279
• 负责人: 河盛 隆造
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659279/
• 关键词: 膵β細胞; インスリン; アセチル化蛋白; 分化; 発生

膵β細胞分化過程には他の細胞と同様、多数の特異的な転写因子群が時間、空間特異的に発現し、厳格に分化を制御することが知られている。この膵β細胞の分化過程を検討するうえでの貴重なモデルがAR42J-B13細胞である。この細胞はactivin A、HGF応答性にインスリン陽性細胞に分化する。しかも、その分化過程における転写因子hierarchyはマウス発生過程におけるそれとかなり近似していることが、私共の研究も含めて明らかになってきている。転写因子の活性化は、DNAのアセチル化が関与するが、それとともに、その転写因子複合体を形成する蛋白もアセチル化することが、知られている。そこで、今回、この分化過程に関与してアセチル化される蛋白の同定を試みた。このAR42J細胞分化前後で核蛋白を抽出し、抗アセチル化リジン抗体を加えた後、プロテインAセファロースにてアセチル化されている蛋白を抽出した。その後、抽出された蛋白を2次元電気泳動法により分離した。抗アセチル化リジン抗体を用いたWestern blottingの結果、AR42J細胞分化前後で変化の認められる発色スポットを、二次元電気泳動スポットマッチングソフトウエア(PDquest等)を用いて確認した。その結果、銀染色で染色され、かつWestern blottingでも検出される蛋白の存在が認められた。この蛋白をトリプシン梢化後、MS/MSにて解析を進め、蛋白の同定を試みているが、蛋白量微量のため、蛋白配列の同定に困難を来たしているのが現状である。

β-cell differentiation is related to other cell types, and most of these factors are specific to time and space. This study of the differentiation process of beta cells is valuable for AR42J-B13 cells. These cells are activin A, HGF responsive, and differentiate into positive cells. The study of the factors in the process of differentiation and differentiation includes the study of the factors in the process of differentiation and differentiation The activation of the transcription factor is related to the formation of a protein complex in DNA. The differentiation process of the protein is related to the protein identity of the protein. AR42J cells before and after the nuclear protein extraction, anti-cell fusion antibody after the addition of protein extraction After extraction, the protein was separated by two-dimensional electrophoresis. Western blotting results of anti-cell culture antibodies, identification of AR42J cells before and after differentiation, and identification of secondary electromigration (PDquest, etc.). Results, silver staining, Western blotting, detection of protein After protein purification, MS/MS analysis, protein identification, protein quantity, protein alignment and identification difficulties