膵β細胞に関わる転写因子の網羅的検索-プロテオミックスの手法を用いて-

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膵β細胞分化過程には他の細胞と同様、多数の特異的な転写因子群が時間、空間特異的に発現し、厳格に分化を制御することが知られている。この膵β細胞の分化過程を検討するうえでの貴重なモデルがAR42J-B13細胞である。この細胞はactivin A、HGF応答性にインスリン陽性細胞に分化する。しかも、その分化過程における転写因子hierarchyはマウス発生過程におけるそれとかなり近似していることが、私共の研究も含めて明らかになってきている。転写因子の活性化は、DNAのアセチル化が関与するが、それとともに、その転写因子複合体を形成する蛋白もアセチル化することが、知られている。そこで、今回、この分化過程に関与してアセチル化される蛋白の同定を試みた。このAR42J細胞分化前後で核蛋白を抽出し、抗アセチル化リジン抗体を加えた後、プロテインAセファロースにてアセチル化されている蛋白を抽出した。その後、抽出された蛋白を2次元電気泳動法により分離した。抗アセチル化リジン抗体を用いたWestern blottingの結果、AR42J細胞分化前後で変化の認められる発色スポットを、二次元電気泳動スポットマッチングソフトウエア(PDquest等)を用いて確認した。その結果、銀染色で染色され、かつWestern blottingでも検出される蛋白の存在が認められた。この蛋白をトリプシン梢化後、MS/MSにて解析を進め、蛋白の同定を試みているが、蛋白量微量のため、蛋白配列の同定に困難を来たしているのが現状である。