ヒト肝臓癌からの癌幹細胞の分離と特性解析

人肝癌中癌症干细胞的分离和表征

• 批准号: 17659393
• 负责人: 千葉 哲博
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Chiba University (2006)Yokohama City University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659393/
• 关键词: 肝臓癌; 癌幹細胞; 幹細胞; FACS; 幹細胞生物学; 階層性; NOD; SCIDマウス

近年、乳癌組織中のESA+CD44+CD24-/low細胞や脳腫瘍培養細胞におけるSP(Side population)細胞が、腫瘍形成能(自己複製能)及び腫瘍不均一性の再構築能(多分化能)を併せ持つことが明らかにされている。本研究では、肝癌細胞中にごく少数存在することが想定される癌幹細胞の分離・同定、さらにはその細胞生物学的特性の解明を目的とした。4種類の肝癌培養細胞HepG2,Huh6,Huh7,PLC/PRF/5をHoechst33342にて染色し、FACS(Fluorescence activated cell sorter^<○R>にて解析したところ、HepG2,Huh6ではSP細胞画分は検出されなかったが、Huh7,PLC/PRF/5ではSP細胞画分は、それぞれ全細胞中の0.25%、0.9%において検出された。細胞純化を行わないHuh7,PLC/PRF/5の腫瘍形成に必要な細胞数は、いずれも1x10^6個であったが、分離されたSP細胞の皮下移植ではそれぞれ5x10^2個、1x10^3個にて腫瘍形成が確認された。Non-SP細胞では、1x10^6個の細胞移植によっても腫瘍は形成されなかった。また、SP細胞から形成された腫瘍のFACSによる再解析では、SP細胞とNon-SP細胞双方の細胞画分が存在することが検出された。Huh7,PLC/PRF/5においては、腫瘍形成能を有する癌幹細胞が極めて少数のSP細胞画分に限定的に存在し、また、このSP細胞からはSP細胞とNon-SP細胞が共に分化することが示唆された。株化のプロセスを経た培養肝癌細胞においでも、癌幹細胞を頂点とした細胞社会の階層構造が維持されている可能性が示唆された。

In recent years, ESA+ CD44 + CD24-/low cells and SP(Side Population) cells in breast cancer tissues have been identified as tumor forming (self-replicating) and tumor heterogeneities (pluridifferentiation). The aim of this study is to elucidate the isolation, identification and cellular characteristics of cancer stem cells, which are rare in hepatocellular carcinoma cells. HepG2, Huh6, Huh7,PLC/PRF/5 were stained with Hoechst33342 and analyzed by FACS(Fluorescence activated cell sorter). The SP cell lines of HepG2, Huh6 and Huh7,PLC/PRF/5 were 0.25% and 0.9% of the whole cells respectively. Cell purification was carried out with Huh7,PLC/PRF/5 and the number of cells necessary for tumor formation was 1x10^6. SP cells were isolated and transplanted subcutaneously with 5x10^2 and 1x10^3 cells. Non-SP cells were transplanted to 1x10^6 cells. The SP cells were formed and the tumor was analyzed by FACS. The SP cells and the non-SP cells were both present. Huh7,PLC/PRF/5, it has been shown that cancer stem cells have the ability to form tumors, but only a limited number of SP cells exist. However, these SP cells can differentiate together with non-SP cells. The possibility of maintaining the hierarchical structure of cancer stem cells in culture is demonstrated.

项目成果

Side population purified from hepatocellular carcinoma cells harbors cancer stem cell-like properties

• DOI: 10.1002/hep.21227
• 发表时间: 2006-07-01
• 期刊: HEPATOLOGY
• 影响因子: 13.5
• 作者: Chiba, Tetsuhiro;Kita, Kaoru;Taniguchi, Hideki
• 通讯作者: Taniguchi, Hideki