ヒト肝細胞で構築された肝臓をもつキメラマウスを利用した抗癌剤感受性試験

使用人肝细胞构建肝脏的嵌合小鼠进行抗癌药物敏感性测试

• 批准号: 17659421
• 负责人: 谷口 堅
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagasaki University (2007)Department of Clinical Research, National Hospital Organization Nagasaki Medical Center (2005-2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659421/
• 关键词: キメラマウス; 肝転移モデル; AFP産生胃癌; uPA/SCIDマウス; 薬剤感受性; 抗癌剤; uPA; SCIDマウス; 転移性肝癌; 抗癌剤感受性試験; Takigawa胃癌細胞株; Taxol

【はじめに】現在、肝転移の動物モデルの報告は散見するが、ヒト肝細胞を背景にした肝転移モデルの報告はない。抗癌剤の薬物動態あるいは肝転移のメカニズムを解明するためにはヒト肝細胞で構築された肝転移モデルが最適である。我々は、吉里らが開発したマウス肝臓の92%をヒト肝細胞に置換した免疫不全キメラマウス(uPA/SCID mouse)を用い、ヒトの生理的環境下に近い肝転移モデルを作製したので報告する。【方法と結果】1)使用する動物:免疫不全と肝障害を持つマウス(uPA/SCID mouse)2)転移形成の至適癌細胞の検討:ヒト肝癌由来細胞株HepG2、Huh-7、AFP産生胃癌由来細胞株(TAKIGAWA)、大腸癌由来細胞株(DLD-1)をマウス(n=5)へ各1.0x10^6個、経脾的に細胞移植を行い、マウス肝臓に生着可能な癌細胞を検討した。3)移植至適細胞数の決定:(1)6x10^5個のTAKIGAWAとヒト肝細胞を注入する群((1)群、n=6)、(2)7.5x1O^5個のTAKIGAWAと7.5x10^5個のヒト肝細胞を注入する群((2)群、n=6)に分けcell mixtureをuPA/SCIDマウス肝内に移植。ヒト肝細胞の置換率判定のため血中ヒトアルブミン濃度、TAKIGAWAの腫瘍増殖を観察するため血中AFP濃度を経時的に測定した。細胞移植後、血中ヒトアルブミン濃度は60日目に最大7.7mg/mlに達した。血中AFP濃度も最大8026ng/mlまで上昇し、病理組織学的にも、置換されたヒト肝細胞の中にAFP陽性の腫瘍形成を確認できた。腫瘍は、AFP染色だけでなく、CEA染色でも陽性細胞をみとめた。又、Ki67染色では、腫瘍部分に有意に陽性細胞があり、ヒト肝細胞には小数の陽性細胞のみ認められた、p53染色では腫瘍細胞のみに陽性細胞が認められた。(2)群の方が、(1)群に比較し、ヒト肝細胞、TAKIGAWA細胞ともに生着した割合は、(1)群が3/6例、(2)群が5/6例であり(2)群の方が至適細胞数と考えられた。【結語】ヒト肝細胞をもつキメラマウスを用い、肝転移モデルを作成した。このモデルは抗癌剤開発ばかりでなく、肝転移メカニズムの解明にも有用である。

[简介]目前，有许多关于肝转移动物模型的报道，但是没有关于基于人类肝细胞的肝转移模型的报道。由人肝细胞构建的肝转移模型是阐明抗癌剂的药代动力学或肝转移机制的最佳选择。我们报告说，我们创建了一种使用免疫缺陷的嵌合小鼠（UPA/SCID小鼠）接近人类生理环境的肝转移模型，其中92％的小鼠肝脏被Kichiri等人开发的人类肝细胞代替。 [Methods and Results] 1) Animals to be used: mice with immunodeficiency and liver damage (uPA/SCID mouse)2) Examination of optimal cancer cells for metastasis: Human liver cancer-derived cell lines HepG2, Huh-7, AFP-producing gastric cancer-derived cell lines (TAKIGAWA), and colon cancer-derived cell lines (DLD-1) were transsplenolytely transplanted into mice （n = 5），检查了可以植入小鼠肝脏的癌细胞。 3）确定移植的最佳细胞数量：将细胞混合物分为注入6x10^5 takigawa和人肝细胞（组（1），n = 6），以及（2）7.5x1O^5 takigawa和7.5x10^5 takigigawa和7.5x10^5人hepatocytes（2）（2），N = 6），N = 6）。细胞混合物被移植到UPA/SCID小鼠的肝脏中。为了确定人肝细胞的替代率，随着时间的推移，测量了血液中人白蛋白的浓度和血液中的AFP浓度，以观察高瓜的肿瘤生长。细胞植入后，血液人白蛋白浓度在第60天达到7.7 mg/ml。血AFP浓度也增加到最大为8026 ng/ml，并且在组织病理学上证实了所替代的人肝细胞中AFP阳性肿瘤的形成。这些肿瘤不仅发现阳性细胞有AFP染色，而且还具有CEA染色。此外，在Ki67染色中，肿瘤部分中存在明显的阳性细胞，并且在人肝细胞中仅观察到分数阳性细胞，在p53染色中，仅在肿瘤细胞中才有阳性细胞。与第（1）组相比，植入（1）组的人肝细胞和高川细胞的比例为3/6例，（2）组中的5/6例被认为具有最佳的细胞数量。 [结论]使用携带人肝细胞的嵌合小鼠创建了肝转移模型。该模型不仅用于开发抗癌药，而且对于阐明肝转移的机理也很有用。