器官共存培養法を用いた骨髄間葉系幹細胞移植治療による中枢神経再生に関する研究

器官共培养法骨髓间充质干细胞移植再生中枢神经系统的研究

• 批准号: 17659471
• 负责人: 石田 治
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659471/
• 关键词: 骨髄間葉系幹細胞; 器官共存培養; 細胞移植治療; 液性因子

本年度はSDラットの脳皮質・脊髄器官共存培養に対しGFPラット由来の骨髄間葉系幹細胞移植を行い以下のような結果を得た。(1)骨髄間葉系幹細胞の分化能についての検討:ラット骨髄間葉系幹細胞を骨・軟骨・脂肪の分化誘導培地による分化誘導を行った。培養後に細胞を国定し、Alizarin Red染色,Safranine O染色、Oil Red O染色によって、移植に用いた骨髄間葉系幹細胞が骨・軟骨・脂肪(間葉系細胞)への多分化能を持つことを確認した。(2)軸索伸長の定量評価:脳皮質・脊髄器官共存培養に対し、PBSを加えた群(対照群)、骨髄間葉系幹細胞を器官共存培養組織上に移植した群(直接移植群)、共存培養組織を培養しているメンブレンの下に骨髄間葉系幹細胞移植を行った群(間接移植群)を作製し、それぞれについてDiIを用いた順行性軸索トレースを行い、脊髄に設けた基準線を越える軸索の本数を蛍光顕微鏡下に計測し、軸索伸長の定量評価を行った。直接移植群と間接移植群の軸索伸長はほぼ同等であり、この2つの群の軸索伸長は対照群と比較して有意に促進されていた。これらの結果から、移植細胞由来の液性因子が軸索伸長を促進していることが示唆された。(3)器官共存培養組織上に骨髄間葉系幹細胞を移植した群で、中枢神経系細胞のマーカーであるnestin(神経前駆細胞)、MAP2(ニューロン)、GalC(オリゴデンドロサイト)、GFAP(アストロサイト)の抗体を用いた免疫染色を行った。移植細胞であるGFP陽性細胞の中にはnestin,MAP2,GalCに陽性となる細胞を認め、移植した骨髄間葉系幹細胞がニューロンやグリア細胞に分化したものと考えられた。ただし、これらの細胞は器官培養あたり1ないし2個のみであった。(4)RT-PCRによる解析により骨髄間葉系幹細胞においてBDNF,CNTF,VEGFなどのgrowth factorのmRNAの発現が確認された。

This year, the following results were obtained from the transplantation of bone mesenchymal stem cells derived from SD and spinal cord organ culture. (1)Differentiation of bone mesenchymal stem cells can be induced by culture of bone, cartilage and fat. After culture, the cells were identified by Alizarin Red staining,Safranine O staining, Oil Red O staining, and transplantation, and the multidifferentiation ability of bone, cartilage, and fat (mesenchymal cells) was confirmed. (2)Quantitative evaluation of axonal elongation: cortical and spinal organ blue-shift culture, PBS addition group (control group), bone mesenchymal stem cells on organ blue-shift culture tissue transplantation group (direct transplantation group), blue-shift culture tissue culture, bone mesenchymal stem cell transplantation group (indirect transplantation group), preparation, treatment, treatment, Axle elongation of direct graft group and indirect graft group is equal, and the axial elongation of two groups is equal to that of two groups. The results showed that the transplanted cell-derived fluid factors promoted axonal elongation. (3)Immunostaining was performed with antibodies to mesenchymal stem cells, neurotrophils, MAP2, GalC, GFAP, and so on in the organ culture. Transplanted cells were found to be positive for nestatin, MAP2,GalC and to differentiate into mesenchymal stem cells. The cell culture of (4)RT-PCR analysis of BDNF,CNTF,VEGF and growth factor mRNA expression in mesenchymal stem cells was confirmed.