权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

長期継代培養細胞を用いた視細胞イオンチャネル異常疾患研究のための実験系構築

利用长期培养细胞研究感光细胞离子通道异常的实验系统的构建

基本信息

批准号：
17659539
负责人：
大日向浩
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト網膜芽細胞腫(Y79株とWERI-Rb-1株)においてnystaatin法による全細胞電位固定実験をおこない、イオンチャネルの同定を試みた。その結果、tetraetahylammonium (TEA)や4-anminopyridineに感受性を示す少なくとも2種類のK^+チャネル、テトロドトキシン(TTX)に感受性を示すNa^+チャネルnifedipineに比較的弱い感受性を示すCa^<2+>チャネルなど、いずれも膜電位依存性のイオンチャネルの存在が示唆された。RT-PCR法により、先天性停止性夜盲症(FSNB)における遺伝子変異が報告されているL型Caチャネルα「サブユニットの網膜アイソフォーム遺伝子(CACNAIF)が、少なくともmRNAレベルではヒト網膜芽細胞腫培養細胞にも発現していることを確認した。現在さらにα_2-、β_1-、β_2-、γ-およびδ-サブユニットの発現を検討中である。今後は、抗体をもちいたWestern blotの実験を進め、タンパクレベルでの発現も検討する。現在、CACNAIFについてsiRNAをいくつか作成し、そのノックダウンを試みている。十分な発現抑制を起すsiRNAが得られたら、特に上記のCa^<2+>チャネル電流の変化に注目した電気生理学的実験を進める予定である。さらに、CACNAIFをノックダウンしたのち、 FSNBにみられるいくつかの点突然変異を人為的に組込んだものを発現させ、電気生理学的特性を調べる。上記と並行して、同一の実験装置を用いウシ毛様体筋の単離細胞を短期培養したものにおいて、先に本研究グループの発見したムスカリン受容体刺激により開口する2種類の非選択性陽イオンチャネルおよびその開口調節に関わる信号伝達系の性質を詳細に検討した。その結果、これらのチャネルはM3型ムスカリン受容体からG_<q/11>を経て送られる信号に応じて開口することを示す見を得た。

The whole cell potential fixation and the simultaneous determination of the growth of retinal bud cells (Y79 strain and WERI-Rb-1 strain) were studied by using the nystatin method. The results showed that tetraethylammonium (TEA) and 4-aminopyridine sensitivity showed that there were less K^+ ions and TTX (TTX) ions in the two species, and the weak sensitivity of Na^+ ions and TTX (TTX) ions in the nifedipine comparison showed Ca^+ ions and TTX (TTX) ions in the membrane potential dependence. RT-PCR method was used to identify L-type Ca2 + gene in FSNB and CACNAIF mRNA in cultured cells of retinal blastoma. Now, α_2-, β_1-, β_2-, γ-, δ- In the future, the development of Western blot for antibody detection will be discussed. Now, CACNAIF is trying to detect siRNA. The development of siRNAs that inhibit gene expression is particularly important in the development of electrophysiological processes. CACNAIF, FSNB, and electrophysiological properties are regulated. In this paper, we first investigate the characteristics of signal transduction system related to two kinds of non-selective cell growth and cell opening regulation in vitro. As a result, the M3-type signal receiver G_(q/11) is displayed.