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内耳性難聴に対する細胞移植と人工内耳の併用治療に関する基礎的研究

细胞移植与人工耳蜗植入联合治疗内耳性听力损失的基础研究

基本信息

批准号：
17659537
负责人：
大森孝一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

平成18年度には平成17年度に引き続いて、モルモットを用いて骨髄間葉系幹細胞を含む細胞群を培養し、ドナー細胞とした。これを移植した際にレシピエント組織と識別するために、前もって骨髄間葉系細胞群の細胞質に緑色蛍光蛋白質GFP、赤色蛍光蛋白mRFP1、mYFPを発現させた。次に、経中耳的に蝸牛開窓術を行い、内耳に蛍光蛋白で標識した自己の骨髄間葉系幹細胞を移植した。細胞移植後、蝸牛開窓部はモルモット自家軟骨を用いて閉鎖し、14日後にモルモットを断頭し内耳の組織標本を作製した。組織標本は蛍光顕微強鏡下に観察を行った。今回の実験系において蝸牛基底回転における鼓室階にmYFPを発現させる細胞が確認された。その他の部位には移植細胞を認めなかった。蛍光蛋白による新規の標識法として、GFPとほぼ同じ色として細胞に発現して、その後に、紫外線に数秒間曝すだけで赤色蛍光蛋白に変わる性質を持っている蛍光蛋白Eosを導入する方法がある。Eosを発現する細胞を移植した後に、ねらった場所に紫外線を局所的にあてられれば、その時期にその場所にある細胞だけを認識でき、細胞の動態を知ることが可能となる。実験動物の聴力障害の程度を評価する方法として、聴性脳幹反応(ABR)を安定して正確に記録するシステムを構築した。電磁波などの影響の少ない環境とするために、電磁シールドされた防音室において、動物、アイソレーター準備し測定した。音刺激(刺激音は20000Hzのtone burst)を与え、ABRを測定した。刺激音の周波数は20000Hzで刺激音圧は76.5dBSPLから36.5dBSPLまで変化させ、ABRを測定した。音圧の低下とともに1からIII波の波形が小さくなり、36.5dBSPLの刺激音圧ではIからIII消失していた。実験動物の取り扱いに関しては福島県立医科大学動物実験ガイドラインに沿って、愛護的に行った。

In 2018, the stem cells of bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in vitro. Green fluorescent protein GFP, red fluorescent protein mRFP1 and mYFP were found in the cytoplasm of mesenchymal cell population during transplantation. In the middle ear and middle ear, the expression of light protein in the middle ear marks the transplantation of bone mesenchymal stem cells. After cell transplantation, the opening part of snail was closed with its own cartilage, and 14 days later, the opening part of snail was closed with its inner ear tissue. The organization is under the microscope. This is the first time that a cell has been identified in the middle of a snail's basal loop. The cells were transplanted to other parts of the body. A new method for labeling fluorescent protein, GFP, fluorescent protein, fluorescent protein, Eos is the first cell in the world to be discovered. Methods for evaluating the degree of stress impairment in animals and for establishing a stable and accurate system for recording ABR Electromagnetic waves affect the environment, and the environment is affected by electromagnetic waves. Sound stimulation (tone burst of 20000Hz) and ABR measurement The number of cycles of the stimulus tone is 20000Hz, the stimulus tone voltage is 76.5 dBSPL, and the ABR is measured. The waveform of the third wave is small, and the stimulus voltage of 36.5dBSPL is small. Fukushima Prefectural Medical University Animal Science and Technology Center