高強度フェムト秒レーザーによる膜脂質の二次元質量分析法の解析

高强度飞秒激光膜脂二维质谱分析

• 批准号: 18651108
• 负责人: 梅田 真郷
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18651108/
• 关键词: 生体膜; 人工膜; リン脂質; 質量分析; フェムト秒レーザー; 人口膜

昨年度までの検討により、ガラス基板に塗布したリン脂質に高強度フェムト秒レーザーを照射し、生じたイオンを質量分析計にて解析した結果、リン脂質の分子イオンが検出され、顕著なフラグメントイオンは検出されないことを見出した。この知見は、この高強度フェムト秒レーザーを用いたレーザー脱離イオン化法により、膜上の脂質分子を直接ソフトイオン化することが可能であることを示している。本年度は、以下の項目について検討を進めた。1) 昨年度まで、リン脂質について解析を進めてきたが、本年度はコレステロールについても解析を進め、親イオンの生成効率を上昇させるための検討を行った。コレステロールガラス基板上に塗布し、加圧電圧4.2kv、パルス幅130fs、波長800nm、周波数10Hzのレーザー光を照射したところ、様々なフラグメントイオンが検出され、有意な親イオンの生成は認められなかった。そこで、温度上昇による親イオンの分解を妨げる目的で、液体窒素により試料を冷却するために冷却装置を導入し、基板を熱伝導の良い銅にかえて検討を行ったが、有意な親イオンの生成は検出されなかった。2) 上記の原因として、冷却装置を導入したために試料導入部からのイオン検出の感度の低下が予想され、さらに装置の改良を進めた。試料導入部・加速部・検出部の位置の適正化を図った結果、予想される親イオンが検出された。3) 生体試料への応用を図る準備段階として、マウス培養上皮細胞のアピカル膜と側底膜を分離し、各部の脂質組成と分子種を質量分析(LC-MS/MS法)により解析した。

Beg に yesterday annual ま で の 検 よ り, ガ ラ に ス substrate coated し た リ ン lipid に high-strength フ ェ ム ト seconds レ ー ザ ー し を exposure, raw じ た イ オ ン を quality analysis meter に て parsing し た results, リ ン lipid の molecular イ オ ン が 検 out さ れ, 顕 な フ ラ グ メ ン ト イ オ ン は 検 out さ れ な い こ と を see out し た. こ の knowledge は, こ の high-strength フ ェ ム ト seconds レ ー ザ ー を with い た レ ー ザ ー from イ オ ン polarization method に よ を の on り, membrane lipid molecules directly ソ フ ト イ オ ン change す る こ と が may で あ る こ と を shown し て い る. For this year に, the following <s:1> items に に て検 て検 て検 て検 are discussed in を めた. 1) yesterday annual ま で, リ ン lipid に つ い て parsing を into め て き た が, this year's は コ レ ス テ ロ ー ル に つ い て も parsing を into め, イ オ ン の generated sharper rate rising を さ せ る た め の 検 line for を っ た. コ レ ス テ ロ ー ル ガ ラ に ス substrates coated し, plus 圧 electric 圧 4.2 kv, パ ル ス 130 fs, 800 nm wavelength, frequency number 10 hz の レ ー ザ ー を sunlight し た と こ ろ, others 々 な フ ラ グ メ ン ト イ オ ン が 検 out さ れ, intentionally な pro イ オ ン の generated は recognize め ら れ な か っ た. そ こ で, temperature rise に よ る pro イ オ ン の decomposition を hinder げ る purpose で, liquid smothering に よ り sample を cooling す る た め に cooling device を import し, substrate を hot 伝 の good い copper に か え て 検 line for を っ た が, intentionally な pro イ オ ン の generated は 検 out さ れ な か っ た. 2) written の reason と し て, cooling device を import し た た め に sample import department か ら の イ オ ン 検 out の sensitivity low の が to think さ れ, さ ら に device の improved を into め た. The test material introduction section, acceleration section, and 検 outlet <s:1> position <e:1> are regularized to を graph った results, and it is expected that される parent <s:1> を が検 が検 output された. 3) the raw body sample へ の 応 with を 図 る prepare Duan Jie と し て, マ ウ ス cultivate epithelial cells の ア ピ カ ル membrane membrane separation を し と side bottom, ministries の lipid composition と molecular を quality analyzing method (LC - MS/MS) に よ り parsing し た.

项目成果

脂質を見る-脂質結合プローブを用いた脂質の分布と動態の解析-

观察脂质 - 使用脂质结合探针分析脂质分布和动态 -

• 发表时间: 2006
• 期刊: 実験医学 24 (6)
• 作者: 小林俊秀;岩本邦彦;加藤詩子;梅由真郷
• 通讯作者: 梅由真郷

膜リン脂質のフリップ・フロップによる細胞運動の制御

通过膜磷脂的翻转控制细胞运动

• 发表时间: 2007
• 作者: 加藤詩子;稲留弘乃;梅田真郷
• 通讯作者: 梅田真郷

Transbilayer phospholipid flipping regulates Cdc42 signaling during polarized cell growth via Rga GTPase-activating proteins.

跨双层磷脂翻转通过 Rga GTPase 激活蛋白调节极化细胞生长过程中的 Cdc42 信号传导。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Developmental Cell 3
• 作者: Saito K.;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Inhibition of reversed electron transfer and proton transport in the beef heart cytochrome bc1 complex by chemical modification.

通过化学修饰抑制牛心细胞色素 bc1 复合物中的反向电子传递和质子传递。

• 发表时间: 2007
• 期刊: The Journal of Biochemistry 141
• 作者: Miki T.;Umeda M.;Harada Y.
• 通讯作者: Harada Y.

Membrane phospholipid flip-flop and its role in cell migration

膜磷脂触发器及其在细胞迁移中的作用

• 发表时间: 2009
• 作者: Utako Kato;Masato Umeda
• 通讯作者: Masato Umeda