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微生物機能の高度化によるランチビオティック工学の創製

通过改善微生物功能创建羊毛硫抗生素工程

基本信息

批准号：
18658034
负责人：
園元謙二
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

Staphylococcus warneri ISK-1が生産するランチビオティック、nukacin ISK-1の生合成に関与するABCトランスポーターNukT(リーダーペプチダーゼ・菌体外輸送タンパク質)のペプチダーゼ機能解析を試みた。NukTは異種発現し、その反転膜小胞を粗酵素液として用いた。基質には、NukA(プレペプチド)とNukM(異常アミノ酸形成酵素)を大腸菌内で共発現して得られる修飾His-NukA(リーダーペプチドと異常アミノ酸をもつペプチド)を用いた。ATP存在下で、修飾His-NukAのリーダーペプチドの切断及び成熟nukacin ISK-1の生産が確認された。また、異常アミノ酸を含まないHis-NukAに対してペプチダーゼを示さなかったことより、NukTは基質中の異常アミノ酸を認識することが示唆された。さらに、ATPのアナログ体であるATP-γ-Sによりペプチダーゼ活性が阻害されたことから、ATPの加水分解がNukTのペプチダーゼ活性に影響することが示唆された。NukTの構造は、N末端よりペプチダーゼドメイン、膜貫通ドメイン、ATP結合ドメインから構成されることが推測されている。そこで、N末端領域を単独で発現、精製し、in vitroで機能解析を行った。その結果、NukTのN末端領域が、リーダーペプチドのプロセッシングに関与する領域であることを明らかとなった。また、補因子としてカルシウムイオンを要求することが明らかとなった。

Analysis of the function of Staphyloccus warneri ISK-1 in the production and synthesis of Nukacin ISK-1 Nukt is a heterogeneous enzyme that can be used to produce and control cell types. The substrate, NukA(Optional) and NukM(Abnormal Acid Forming Enzyme) are co-produced in Escherichia coli and are used in the modified His-NukA(Optional). In the presence of ATP, the production of modified His-NukA and mature nukacin ISK-1 was confirmed. Anomalous acid in NukT matrix is recognized by His-NukA. ATP-γ-S is the active inhibitor of ATP and ATP hydrolysis is the active inhibitor of ATP. NukT structure, N-terminal structure, membrane penetration structure, ATP binding structure, etc. The N-terminal domain is unique, refined, and functional. As a result, the N-terminal domain of NukT is divided into two categories: The reason for this is that they have to be able to do something about it.

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

酵素の開発・利用の最新技術

酶开发利用最新技术

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Koji Fujita et al.;Koji Fujita et al.;米山史紀ら;Koji Fujita et al.;Takeshi Zendo et al.;Sikder Mohammad Asaduzzaman et al.;Jun-ichi Nagao et al.;Takeshi Zendo et al.;Sikder Mohammad Asaduzzaman et al.;Jun-ichi Nagao et al.;Takeshi Zendo et al.;善藤威史ら;Sikder Mohammad Asaduzzaman et al.;Jun-ichi Nagao et al.;園元謙二ら;Takeshi Zendo et al.;Takeshi Zendo et al.;Koichi Kuwano et al.;Takeshi Zendo et al.;Koichi Kuwano et al.;園元謙二ら;園元謙二ら;Takeshi Zendo et al.;Koichi Kuwano et al.;麻生祐司ら
通讯作者：
麻生祐司ら

Lactococcin Q, a Novel Two-Peptide Bacteriocin Produced by Lactococcus lactis QU 4