Ets2を標的遺伝子とした脳腫瘍浸潤抑制法の確立

以Ets2为靶基因抑制脑肿瘤侵袭方法的建立

• 批准号: 18659430
• 负责人: 藤川 浩一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hyogo College of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659430/
• 关键词: グリオーマ; 浸潤; 遺伝子治療; Ets2

前年度に引き続き、ヒト・グリオーマ由来細胞株に対してレトロウイルスベクターを用いる事によりEts2の強制発現およびsiRNAによるノックダウン細胞株の樹立をおこなった。A172,U251,T98,SF126細胞株を用いて、それぞれEts2を高発現する安定化細胞株およびEts2をノックダウンした細胞株を樹立した(合計8種の細胞株)。全ての細胞株において形態学的変化は認められなかった。さらに、各細胞株の分裂速度をMTT assayにより決定したが、明らかな違いは認められなかった。また、Invasion assayにより浸潤能の違いを比較検討したが、これに関しても明らかな違いを認める事はできなかった。そこで、転写因子であるEts2が認識するETS結合配列に同じく結合するEts1を用いて同様の実験をおこなったが、Ets1の場合にも腫瘍由来細胞の増殖速度および浸潤能に明らかな違いは認められなかった。近年の報告によると、Ets2タンパク質は転写因子でありながら核内ではなく細胞質内において何らかの作用を持つ事が示唆されており(特に神経細胞)、Ets2タンパク質が細胞質内の何らかのタンパク質と結合すると考えられている。そこで、上記の4種類のグリオーマ由来細胞株に対してDNA結合ドメイン(核移行シグナルを含む)を欠損したEts2を強制発現させる実験をおこなった。その結果、全ての細胞株において増殖速度の低下が認められるという興味深い結果を得る事ができた。現在は免疫沈降法を用いてEts2タンパク質と結合する細胞質内タンパク質の同定を試みているところであるが、市販のEts2抗体では良好な結果が得られないため、独自で新規抗体の作成をおこなっているところである。

In the past year, the stress response and siRNA response of Ets2 in cell lines were established. A172,U251,T98, SF126 cell lines were used to establish stable cell lines and Ets2 cell lines (8 cell lines in total). All cell lines are morphologically transformed. The mitotic rate of each cell line was determined by MTT assay. Invasion assay, Invasion assay, Invasion The growth rate of the tumor-derived cells and the infiltration energy of the cells are recognized by the combination of ETS and Ets. In recent years, there have been reports on the role of Ets2 in cytoplasmic interaction with nuclear factors, especially in neurons, and on the role of Ets2 in cytoplasmic interaction with cytoplasmic factors. The four types of cell lines listed above are related to DNA binding. The results, the growth rate of the whole cell line is low, and the results are deep. Now, the immunosedimentation method is used to test the identity of the cytoplasm of the Ets2 antibody. The results are good. The preparation of the new antibody is independent.