ユーイング肉腫マウスモデルの樹立と解析

尤文氏肉瘤小鼠模型的建立及分析

• 批准号: 18659439
• 负责人: 細江 英夫
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659439/
• 关键词: ユーイング肉腫; 骨軟部腫瘍; EWS; Flil; マウスモデル; トランスジェニック; 貴伝子; ゲノム; 分子生物学; Fli1; 遺伝子

前年度、サブクローニングした遺伝子をマウス胎性幹細胞(embryonic stem(ES)cells)に導入し、in vitroでの発現形式の確認を行った。その結果、2つのcell lineで2^<nd> reporter geneの発現(hPLAPの発現(アルカリフォスファターゼ染色で紫色に染色))を確認できた。そしてこれらPositiveなES細胞のcell lineをマウス受精卵に顕微鏡下に注入し、その受精卵を偽妊娠させたメスマウス子宮内に注入し、何とかキメラマウスを誕生させることに成功し、EWS/Fli1融合遺伝子を持つであろうトランスジェニックマウスを誕生させることができた。そして誕生したマウスの耳もしくは尾の切片よりDNAを抽出し、1^<st> reporter gene(βガラクトシダーゼ)の発現(LacZ染色)を確認したところ、どういうわけか発現を認めなかった。そのため、LacZ近辺のプライマーを作成してPCRを行ったところ、バンドを確認できた。次いでCreトランスジェニックマウス(pCX-Cre)とEWS/Fli1トランスジェニックマウスを掛け合わせ、EWS/Fli1の発現を試みたが、2^<nd> reporter gene(hPLAP)の発現が確認できなかった。同様にEWSFli1近辺でプライマーを作成してPCRを行ったところ、バンドを確認できた。さらにEWSFli1蛋白の同定を行ったが、バンドを認めなかった。つまりreportergeneおよびEWS/Fli1の遺伝子は共に存在するがサイレントジーンとなり、2ラインとも発現はしなかった。今後遺伝子発現させるべく、p53ノックアウトマウスとの交配などを検討し解析していきたい。あるいは別のアプローチで腫瘍発現マウスの作成に取り掛かりたい。

In the past year, the introduction of embryonic stem(ES)cells and the identification of their development forms in vitro have been carried out. The result of the test is that the 2^ reporter gene appears in the cell line <nd>(hPLAP appears in purple). The cell line of positive ES cells was injected into the uterus under microscope, and the fertilized eggs were injected into the uterus. The cells were born successfully. The EWS/Fli1 fusion gene was born successfully. DNA was <st>extracted from the sections of the cells, and the reporter gene(β) was identified by LacZ staining. The next step is to confirm the PCR sequence. The <nd>second is to identify the occurrence of the reporter gene(hPLAP) and the occurrence of the EWS/Fli1. The same EWSFli1 near the top of the list to create a PCR to determine the location. The EWSFli1 protein was identified by DNA sequencing. EWS/Fli1 is a gene that exists in all parts of the world. In the future, when the virus appears, it will be analyzed. It's not like you're going to be able to make it happen.