权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

難治性疼痛に対する新たな治療法の開発

开发顽固性疼痛的新疗法

基本信息

批准号：
18659587
负责人：
平野博之
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は前年度に得られた脊髄への遺伝子導入の手技をもとに、実際に鎮痛遺伝子とレボーター遺伝子を持つプラスミドを作成し、in vivoで実際の疼痛に対する治療効果があるかどうかを検討した。1.鎮痛遺伝子であるβ-endorphinの前駆体、proopiomelanocortinの抽出マウス(C3H)全脳より逆転写反応にてcDNAを合成、設計したプライマーにてPCR反応を行い標的遺伝子(POMC)を増幅・回収。2.プラスミドの作成得られた遺伝子を業者に外注しレポーター遺伝子であるGFPを持つプラスミドベクターヘクローニング(pTracer-CMV Bsd, invitrogen)。3.タンパク発想の確認作成したプラスミドが標的タンパクを発現するかどうかinvitroで確認した。293T細胞に超音波エコーを用いて遺伝子導入した結果、コントロール(GFPのみ)と比較するとGFP発現自体かなり少量であった(100:5個)。種々条件を変更し、最も発現量の多いと思われる条件にてマウスへの導入を行った。4.マウスへの遺伝子導入およびタンパク発現・機能の確認前年度に確立した手技により脊髄に遺伝子を導入した。GFPタンパクの発現を病理組織切片を作成し蛍光顕微鏡にて経時的に観察したが、コントロールに比して明らかに発現量が少なく、定量化できなかった。しかし、機能的に鎮痛効果が発現している可能性も考え、ホットプレート試験にて観察したが、コントロール群と比べて有意差は見られなかった。以上より、今後プラスミドDNAの形状を詳細に検討し、改良を加え、さらなる導入効率の向上をin vitroにて確認の後、再度動物実験にて鎮痛効果の確認を行いたい。現在も進行中である。

This year, compared with the previous year, we have obtained the results of manual and practical analgesic gene introduction, in vivo and in vivo pain management. 1. Analgesic gene β-endorphin precursor, proopiomelanocortin extraction (C3H) complete synthesis, design, reverse transcription PCR reverse transcription target gene (POMC) amplification and recovery 2. To create a new vector for a new industry, GFP is required to maintain a new vector (pTracer-CMV Bsd, invitrogen). 3. Confirm whether to make a request or not. 293T cells were induced by ultrasound and GFP was detected in a small amount (100:5). The condition of the species is changed, and the quantity of the species is changed. 4. The introduction of genetic information in the previous year was established. GFP is detected in pathological sections, and the amount of GFP detected is reduced and quantified by microscopy. The possibility of the analgesic effect of the function is examined, and the possibility of the analgesic effect of the function is examined. In the future, the shape of DNA will be discussed in detail, and the introduction rate will be confirmed in vitro, and the analgesic effect will be confirmed again. Now we're in the middle of it.