間葉系幹細胞の一過性notch発現制御による神経細胞分化誘導の研究

间充质干细胞Notch表达瞬时调节诱导神经元分化的研究

• 批准号: 19659056
• 负责人: 永富 良一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659056/
• 关键词: 神経細胞; 間葉系幹細胞; Notch; パッチクランプ; Naチャネル; Caチャネル; NMDA受容体; パルス電気刺激; siRNA; MAP2; Tuj1; 電気刺激

多能性分化能を有する間葉系幹細胞のNotch発現をsiRNAで抑制することにより神経細胞様の形態を持ち、神経細胞特異的マーカーが陽性な細胞に分化誘導できることを確認した。しかしパッチクランプ法を用いて細胞膜電位の測定および活動電位の誘導を講みたが活動電位は誘導できなかった。電位非依存性Naチャネルの発現はNatch抑制により強く誘導されたが、電位依存性チャネルの誘導は得られなかった。ピストン脱メチル化酵素あるいはDNAメチル化酵素の阻害はそれぞれ電位依存性NaチャネルmRNAの発現につながったが、Natch抑制を行うと発現が減弱した。そこで間葉系幹細胞にパルス電気刺激を行った結果、Natch抑制条件下においてもヒストン脱メチル化酵素、DNAメチル化酵素阻害による電位依存性Naチャネルの一部の発現が維持されることがわかった。しかし活動電位を得ることには至っていない。mRNAの発現は得られても活動電位を得るのに十分なタンパク発現が得られていない可能性が考えられた。Ca流入を制御する神経組織に特異的な受容体としてNMDA受容体があげられるが、興味深いことに間葉系幹細胞にパルス電気刺激を行うだけでNMDA受容体mRNAの発現が誘導されること、さらにNMDA刺激を行うことにより細胞内Ca濃度が上昇することがわかった(Okutsu, S et al Tohoku J Exp Med. 2008)。したがって間葉系幹細胞の機能的な神経細胞への分化誘導は一過性のNatch抑制に加えてepigeneticな制御および興奮性刺激を行うことにより未だ不完全ではあるが、実現できる可能性があることが明らかになった。上述した進行状況の中でin vivoの脊髄損傷マウスにおける再生実験に取りかかることはできなかった。現在機能的な電位依存性チャネルを誘導する条件を検討中である。

Pluripotent differentiation can lead to the inhibition of phenotypic phenotype, the presence of Notch, the inhibition of phenotypic phenotype, the presence of specific cellular phenotype, the induction of cellular differentiation and the confirmation of cellular differentiation. In this method, we use the cell membrane potential meter to determine the active electric potential of the mobile phone. Potential-independent Na devices show that Natch suppresses and potential-dependent devices cause significant changes. The DNA enzyme blocks the voltage dependence of the cell. The Na voltage is dependent on the voltage. The mRNA shows that the enzyme is sensitive, and the Natch inhibits the activity of the enzyme. This is due to the results of cell-mediated electrical stimulation experiments, the removal of enzyme enzymes and DNA enzyme inhibitors in the presence of Natch inhibition, and the inhibition of cell potential dependence by DNA enzyme enzymes. One of the most effective methods for the maintenance of cell phone potential dependence is to maintain the activity of cell phone. The location of the mobile phone can be adjusted to the level of the mobile phone. It is very difficult for mRNA to realize the possibility that the mobile phone will be rewarded. The flow of Ca into the recipient body of the host organization, the NMDA recipient, the capacitor, the cell, the NMDA, the mRNA, the NMDA, the Okutsu, the S et al Tohoku J Exp Med, the Okutsu, the S et al Tohoku J Exp Med. 2008). This is the mechanism of cellular differentiation that leads to the suppression of Natch and the control of sexual stimuli by the combination of epigenetic. In the case of the above-mentioned situation, the in vivo system is in operation. The regeneration system is in good condition. At present, the electrical potential dependence of the mechanical energy is dependent on the electrical potential of the machine.

项目成果

Electric pulse stimulation induces Ca2+ influx into NIH3T3 fibroblasts through L-type calcium channel and promotes expression of NMDA receptor mRNA

电脉冲刺激诱导Ca2通过L型钙通道流入NIH3T3成纤维细胞并促进NMDA受体mRNA表达

• 发表时间: 2008
• 期刊: Tohoku Journal of Experimental Medicine 215(In press)
• 作者: Saeko Okutsu;Hiroyasu Hatake yama;Makoto Kanzaki;Hiroshi Tubokawa;Ryoichi Nagatomi
• 通讯作者: Ryoichi Nagatomi

Electric pulse stimulation induces NMDA glutamate receptor mRNA in NIH3T3 mouse fibroblasts

• DOI: 10.1620/tjem.215.181
• 发表时间: 2008-06-01
• 期刊: TOHOKU JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE
• 影响因子: 2.2
• 作者: Okutsu, Saeko;Hatakeyama, Hiroyasu;Nagatomi, Ryoichi
• 通讯作者: Nagatomi, Ryoichi