多重蛍光可視化技術による組織改築と機能の解析

使用多重荧光可视化技术分析组织重塑和功能

• 批准号: 19659103
• 负责人: 栗原 敏修
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659103/
• 关键词: 可視化技術; 組織改築

本研究課題の最終的な到達点は、メダカの心臓構成細胞にそれぞれ異なる蛍光蛋白質を発現させて1個体で多重蛍光から心筋組織構築を各細胞のみならず組織全体を生きたままで観察することである。心臓組織構成細胞のそれぞれを異なる蛍光で可視化するという手法は世界初であり、一個体で発生や臓器形成といったプロセスを生きたままで観察できることは、組織修復過程の観察にも有効である。多重蛍光組織可視化動物作製に先立ち各構成細胞特異的候補遺伝子の選定やプロモーター解析にあたり、現在までに蓄積された基礎データを用いて詳細に評価することは、本研究実現のプロセスで最重要項目である。平成19,年度研究では候補遺伝子の選定とそのプロモーター解析に取り組んだ。プロモーターの選択にあたり、心筋ではトロポニン、アクチン遺伝子、血管系ではFli 1遺伝子、神経系ではDBH遺伝子、赤血球ではグロビン遺伝子を候補とした。これら候補遺伝子のヒト、マウス、.ゼブラフィッシュの配列データを元にメダカゲノムデータベースでBLAST検索を行い、メダカホモログを予測した。予測された配列データを元に特異的プライマーを合成した。メダカの心臓から抽出したm-RNA群を鋳型とし逆転写酵素で合成したcDNAライブラリーから、各遺伝子をクローニングし、その配列を読んでメダカホモログを同定した。各遺伝子の特異的プロモーター領域があれば他種でのデータを参考にし、なければ上流1kb〜4kbと仮定し、メダカ尾部から抽出したゲノムDNAを鋳型として合成した特異的プライマーを使用しPCRで増幅し、複数候補のスクリーニングを試みた。それぞれのプロモーターに異なる蛍光レポーター遺伝子をつないだコンストラクトを作製するにあたりマイクロインジェックション装置を用いて受精卵にマイクロインジェクションすることで組織特異的な発現が期待できる候補プロモーターコンストラクトであるか検討した。マイクロインジェクションした受精卵で組織特異的発現が確認できたのは、Fli1、グロビンとなった。今後、更に候補遺伝子のスクリーニングを継続し、多重蛍光組織可視化動物作製に繋げたい。

The ultimate goal of this research project is to discover the cellular structure of the heart and to examine the cellular structure of the heart. The heart is composed of cells that are different from each other. The method of visualization is the beginning of the world. The formation of an organ is the beginning of the world. The process of tissue repair is observed. The selection, analysis and accumulation of candidate genes specific to each constituent cell in the animal system of multiple fluorescence tissue visualization are the most important items in this study. Heisei 19, Annual Research Select a candidate for a candidate.これら候补遗伝子のヒト、マウス、. The best way to predict the future of a BLAST is to set up a blast search engine and a blast search engine The prediction is based on the following: The expression of m-RNA in different genes is different from that in other genes. Each gene has its own unique domain, which includes reference sites, upstream sites of 1kb to 4 kb, and tail sites that are specific to DNA typing and synthesis. All kinds of fertilized eggs can be used in different ways, such as in different ways, in different ways, in different ways Tissue-specific development of fertilized eggs was confirmed. In the future, more candidates will be selected for selection, and multiple illumination will be used to visualize animal behavior.