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Isolation and identification of starfish gonad-stimulating substance.

海星性腺刺激物质的分离与鉴定。

基本信息

批准号：
01480028
负责人：
SHIRAI Hiroko
金额：
$ 4.54万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

Procedure for starfish gonad-stimulating substance was reexamined and two series (I and II) of the procedure were established. I-1. nerve collection, I-2. GSS extraction (homogenization in acid ethanol), I-3. delipid (partition with chloroform and ether), I-4. desalting (partition chromatography with Poragel PN in PrOH step-wise elution), I-5. gel-permeation chromatography ( Sephacryl S-200), I-6. isoelectric forcusing electrophoresis, I-7. normal phase partition chromatography (Licrosorb diol gel in PrOH gradient elution), I-8. reverse phase partition chromatography (ODS gel in acetoniterile gradient elution), and II-1, 2, 3. the same as the first series, II-4. desalting and gel permiation chromatography (sephadex G-50), II-5. ion-exchange chromatography ( ES-50ZN gel), II-6. reverse phase partition chromatography (ODS gel in acetoniterile gradient elution), II-8. second reverse phase partition chromatography (ODS gel in isocratic elution: 0.1% trifluoroacetic acid-10% prOH-18% acetoniterile).Through the first series, GSS of Asterias amurensis was isolated and partial aminoacid sequence was analyzed (AEKYVGMGSYMALVGR from the N terminal). Based on the sequence a peptide was synthesized. Although the synthesized peptide neither showed the GSS activity nor inhibitory activity for GSS, its antiserum interacted with the native GSS of both Asterias and Asterina.DNA probes based on the aminoacid sequence of Asterias GSS were synthesized (sense and antisense). Positive DNA fragment have not been obtained yet. Above mentioned anti-synthesized peptide IgG will be used for detecting the possible GSS DNA.

对海星性腺刺激物质的分离方法进行了重新研究，建立了海星性腺刺激物质分离方法的两个系列（Ⅰ和Ⅱ）。I-1号公路神经收集I-2 GSS提取（在酸性乙醇中均质化），I-3。脱脂（用氯仿和乙醚分配），I-4。HPLC（在PrOH中用Poragel PN逐步洗脱的分配色谱法），I-5。凝胶渗透色谱法（Sephacryl S-200），I-6。等电强制电泳，I-7。正相分配色谱法（Licrosorb二醇凝胶在PrOH中梯度洗脱），I-8。反相分配色谱法（ODS凝胶在乙腈中梯度洗脱），和II-1，2，3。与第一个系列II-4相同。凝胶渗透色谱（Sephadex G-50），II-5。离子交换色谱法（ES-50 ZN凝胶），II-6。反相分配色谱法（ODS凝胶在乙腈中梯度洗脱），II-8。第二次反相分配层析（ODS凝胶，等度洗脱：0.1%三氟乙酸-10%prOH-18%乙腈），通过第一次反相层析分离了海盘车GSS，并对部分氨基酸序列进行了分析（从N端开始为AEKYVGMGSYMALVGR）。基于该序列合成肽。尽管合成的肽既没有表现出GSS活性，也没有对GSS的抑制活性，但其抗血清与阿斯特里亚属和阿斯特里亚属的天然GSS相互作用。根据阿斯特里亚属GSS的氨基酸序列合成了DNA探针（有义和反义）。尚未获得阳性DNA片段。上述抗合成肽IgG将用于检测可能的GSS DNA。