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非特異性炎症性腸疾患(I.B.D.)の病因、病態への腸内細菌叢の関与ー病変粘膜細菌叢の解析結果を踏まえてー

肠道菌群参与非特异性炎症性肠病（I.B.D.）的病因和病理学 - 基于病变粘膜菌群的分析结果 -

基本信息

批准号：
01480225
负责人：
細田四郎
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

非特異性炎症性腸疾患(I.B.D.)である潰瘍性大腸炎(UC)およびクロ-ン病(CD)の病因、病態には腸内細菌叢が関与すると考えられる。実際、本症病変部直腸粘膜における細菌叢は、健常者粘膜に比して、総菌数、嫌気性菌数が増加し、偏性嫌気性菌群では、Bacteroides vulgatus,Clostriduum ramosum,B.fragilisの分離頻度が高い。菌体凝集反応にて、これら菌種に対する本症患者の免疫応答を検討すると、高率に高力価の抗体活性が血中に見いだされる。本研究では、これらの知見を基礎として、本症病変部粘膜で高率に分離される粘膜細菌叢構成菌に対する免疫応答の成立の本症の病態への関与を、対応菌体膜表面蛋白抗原を特定することにより検討を加えた。すなわち、Nーラウロイルサルコシンにて抽出、精製した菌体外膜蛋白のイムノブロット法による対応抗原蛋白を検討し、B.vulgatusでは、26K,34K,54K,86K dalton蛋白がIgG型抗体で認識され,このうち26KD蛋白は、IgA型抗体によっても本症で特異的に高頻度に認識されることを見いだした。しかし、B.fragilis外膜蛋白分画中には、本症で特異的な対応抗原蛋白は見いだされなかった。C.ramosumは外膜蛋白分画の精製が困難なことより、全菌体抽出蛋白分画について検討したが、対応抗原は同定し得ていない(O'Farrell二次元電気泳動による検討を必要としている)。一方,通性嫌気性菌群で最も高頻度に分離されるEscherichia coliの50KD外膜蛋白が、本症とくにCDで特異的に認識されていることがみいだされた。このB.vulgatusプ-ル,E.coliプ-ルの全菌体外膜蛋白を用いたELISAでは、CDでIgA型抗体について有意な高値が見いだされた。Mono Q、Superose12(FPLC)にて精製したB.vulgatus26KD蛋白、E.coli50KD蛋白を用いたELISAは、菌株により当該蛋白発現量、抗原性の差もみられ、その疾患特異性を結論するには、さらに多数菌株、多数例による慎重な検討が必要であると判断された。

Nonspecific inflammatory bowel disease (I.B.D.) Ulcerative Colitis (UC) and Colorectal Disease (CD) are the causes and pathologies of intestinal bacterial flora. In fact, the bacterial flora in the rectal mucosa of the diseased part was higher than that in the normal part, the total number of bacteria and the number of pathogenic bacteria increased, and the isolation frequency of the partial pathogenic bacteria was higher. Bacteroides vulgaris, Clostridium ramosum,B.fragilis was higher. The immune response of patients with this disease is discussed in terms of cell agglutination and high rate of antibody activity in the blood. This study is based on the understanding of the disease, the high rate of isolation of mucosal bacterial flora, the establishment of immune response and the identification of bacterial membrane surface protein antigens. B.vulgatus dalton proteins at 26K,34K,54K,86K are recognized as IgG-type antibodies, while 26KD proteins are recognized as high frequency specific to IgA antibodies. B.fragilis outer membrane proteins are classified into two groups: one is specific to the disease, the other is specific to the disease C.ramosum is difficult to refine the outer membrane protein profile, the whole cell extract protein profile is difficult to identify, and the antigen is difficult to identify. In one case, the most frequent isolation of Escherichia coli was 50KD outer membrane protein, and the disease was CD specific. B.vulgatus,E.coli and their whole cell outer membrane proteins were detected by ELISA and CD-IgA antibodies were found to have high values. Mono Q and Superose12(FPLC) were purified to B.vulgatus26KD protein and E.coli50KD protein by ELISA. The results showed that the protein production, antigenicity, and disease specificity of Mono Q and Superose12 (FPLC) were significantly different.