好熱菌のシトクロムオキシダ-ゼ;遺伝子工学的手法の利用による構造機能連関の解析

嗜热细菌的细胞色素氧化酶；利用基因工程方法分析结构与功能关系

• 批准号: 02454546
• 负责人: 曽根 専史
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu Institute of Technology (1991)Jichi Medical University (1990)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02454546/
• 关键词: 好熱菌; シトクロムオキシダ-ゼ; 呼吸鎖; プロトン輸送; 形質転換; チトクロムオキシダ-ゼ; 構造機能連関

1。前年度にひきつずき好熱性バシラスにDNAを導入し形質転換をおこさせる方法を改良し、プラスミドpUB110あるいはそれからホモロガスレコンビネ-ション用に作成したpUB11(Tc)を約1万個/μgDNAの効率でB.stearothermophilusに導入することができた。2。pUB11(Tc)を制御酵素で切断し1041株に導入したところ、テトラサイクリン感受性でちいさなコロニ-をつくりTMPD(テトラメチルーpーパラフェニレンジアミンを酸化する活性の低い株をとることができた。現在、この株が意図したようにホモロガスレコンビネ-ションをおこしオキシダ-ゼ(caa_3)マイナスかどうかを、DNAと蛋白質の面から検討している。3。ニトロソグアニジンを変異元として好熱性バシラスPS3より種々のTMPD酸化能がおおはばに減少した変異株を分離し、その性質を決定した。これらの変異株の膜画分はNADHを基質に活発に呼吸するが、シトクロムc酸化活性は大幅にげんしょうしている。またその可視スペクトルの解析はこのような変異株ではシトクロムcまたはシトクロムa(a_3)の存在量が大幅に減少していた。4。これらの結果、細菌の末端酸化酵素について新しい研究方法と視点を打ち出すことができた。

1。In the past year, the method for introducing DNA into a thermophilic medium has been improved, and the efficiency of introducing gDNA into a thermophilic medium has been improved. 2。pUB11 (Tc) inhibits the enzyme from being introduced into 1041 strains, and the sensitivity of the enzyme to acidification is low. Now, this plant has the meaning of " 3。TMPD can reduce the number of heterosis and determine the nature of heterosis. The membrane components of these mutants are highly reactive with NADH. The number of visible species in the analysis of a(a_3) is significantly reduced. 4。The results of this study, bacterial terminal acidifying enzymes, and new research methods

项目成果

N.Sone,T.Takagi: "Monomerーdimer structure of cytochrome c oxidase and cytochrome bc_1 complex from the thermophilic bacterjum PS3" Biochim.Biophys.Acta. 1020. 207-212 (1990)

N.Sone，T.Takagi：“来自嗜热菌 PS3 的细胞色素 c 氧化酶和细胞色素 bc_1 复合物的单体-二聚体结构”Biochim.Biophys.Acta。1020.207-212 (1990)

曽根 〓史: "新生化学実験講座.第5巻(分担執筆:4.5電子伝達系のプロトン輸送能)" 東京化学同人, (1992)

Fumi Sone：“新生物化学实验教程。第5卷（贡献者：4.5电子传输链的质子传输能力）”东京化学同人，（1992）

Sone,N.,and Fujiwara,Y.: "Haem A can replace haem A in the active site of cytochrome c oxidase from thermophilic bacterium PS3" FEBS Letters. 288. 154-158 (1991)

Sone,N. 和 Fujiwara,Y.：“血红素 A 可以取代嗜热细菌 PS3 细胞色素 C 氧化酶活性位点中的血红素 A”FEBS Letters。

N.Sone,S.Shimada,T.Ohmori,Y.Souma,M.Gonda,M.Ishizuka.: "A fouth subunit is present in cytochrome c oxidase from the thermophilic bacterium PS3" FEBS Letter. 262. 249-252 (1990)

N.Sone、S.Shimada、T.Ohmori、Y.Souma、M.Gonda、M.Ishizuka.：“嗜热细菌 PS3 的细胞色素 c 氧化酶中存在第四个亚基”FEBS 信件。

M.Ishizuka,K.Machida,S.Shimada,A.Mogi,T.Tsuchiya,T.Ohmori,Y.Souma,M.Gonda,N.Sone: "Nucleotide sequence of the gene coding for four subunits of cytochrome c oxidase from the thermophilic bacterium PS3" J.Biochemistry. 108. 866-873 (1990)

M.Ishizuka、K.Machida、S.Shimada、A.Mogi、T.Tsuchiya、T.Ohmori、Y.Souma、M.Gonda、N.Sone：“编码细胞色素 c 氧化酶四个亚基的基因的核苷酸序列