3型プロスタノイドの超微量定量を目的としたモノクローナル抗体の作製

用于 3 型前列腺素类超痕量定量的单克隆抗体的生产

• 批准号: 03454502
• 负责人: 菱沼 隆則
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03454502/
• 关键词: プロスタグランジン; モノクローナル抗体; GC; MS; Δ^<17>-6-keto-PGF^<1d>; エイコサペンタエン酸; モノクロ-ナル抗体

エイコサペンタエン酸(EPA)は、体内でアラキドン酸カスケードにより代謝され種々の3型プロスタグランジン(PG)に変換される。これら3型PGは微量かつ不安定であるが、EPAの生理学的意義を解明するには3型PGの超微量定量法を確立することが必要である。そこで、今回、GC/MSを用いた生体試料中の3型PGの超微量定量法の確立とその検出量の評価を行なうため、迅速かつ簡便な前処理法を可能とする、抗3型PGモノクローナル抗体の作製を行った。本研究では3型PGとして、抗血小板凝集作用を有するPGI_3の安定代謝体Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>を対象とした。EPAの牛大動脈内皮細胞を用いた生物変換を行い、約120μgのΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>を得た。同化合物を^<18>O標識化し、得られた^<18>O標識体を内部標準物質として用いる、GC/SIMによる超微量定量法を確立した。つぎに、生体試料中からの3型PGの抽出を迅速にかつ簡便にするため3型PGに対するモノクローナル抗体の作製を行った。すなわち2型と3型の構造の相違である17位のcis二重結合に着目し、同部位のモデル化合物cis-3-hexen-1-olとヒト血清アルブミン(HSA)との結合体を免疫原として特異抗体を作製した。得られたモノクローナル抗体は3型PGと高い反応性を有し、同抗体を用いて作製した抗体カラムは、迅速かつ簡便なΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>の抽出を可能にした。本法を用いる時、健常人の血中から20-80pg/mlのΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>が検出された。さらに、Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>に対するモノクローナル抗体を同様に作製した。同抗体は、Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>との高い反応性を有するため、本抗体を用いた生体試料中のΔ^<17>-6-keto-PGF_<1α>の回収や濃縮を前処理法とするGC/SIM法や、RIAやEIAを用いた直接定量により、各種疾患に伴う含量変化等の検討が可能になるものと考えられる。

エ イ コ サ ペ ン タ エ ン acid (EPA) は, body で ア ラ キ ド ン acid カ ス ケ ー ド に よ り metabolic さ れ kind 々 の type 3 プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン (PG) に variations in さ れ る. こ れ trace か ら 3 PG は つ unrest で あ る が, EPA の physiology を interpret the meaning of す る に は type 3 PG の ultramicro を quantitative method to establish す る こ と が necessary で あ る. そ こ で, today back, GC/MS を い た の in living body sample type 3 PG の ultramicro の quantitative method to establish と そ の measure 検 の review 価 を line な う た め, rapid か つ simple before な 処 logos を may と す る, resistance type 3 PG モ ノ ク ロ ー ナ ル を line the antibody の cropping っ た. This study で は type 3 PG と し て, antiplatelet aggregation function を す る PGI_3 の stability and metabolism of body Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > を like と seaborne し た. EPA を の bovine aortic endothelial cells with い た biological variations in line を い, about 120 mu g の Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > を た. With compound を ^ < > 18 O logo し, too ら れ た ^ < > 18 O logo body を internal standard substance と し て in い る, GC/SIM に よ る ultramicro を quantitative method to establish し た. つ ぎ に, body in the sample か ら の type 3 PG の spare を quickly に か つ simple に す る た め type 3 PG に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル を line the antibody の cropping っ た. す な わ ち 2 と 3 の tectonic の conceives で あ る 17 の cis double combination に mesh し, with parts の モ デ ル compound cis - 3 - hexen - 1 - ol と ヒ ト serum ア ル ブ ミ ン (HSA) と の combination を immunogen と し て specific antibodies を cropping し た. Have ら れ た モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody は type 3 PG と high い を have し 応 sex, with antibody を い て cropping し た antibody カ ラ ム は, rapid か つ simple な Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > の may take を に し た. When this law を with い る, the healthy normal の blood か ら 20-80 pg/ml の Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > が 検 out さ れ た. Youdaoplaceholder0, Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>に against するモノ ロ ロ ナ ナ を the same as に for the production of に た. With antibody は, Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > と の high い anti 応 sex を have す る た め, this antibody を い た raw body sample の Δ ^ < 17 > - 6 - keto - PGF_ < 1 alpha > の back 収 や enrichment before を 処 logos と す る GC/SIM や, RIA や EIA を with い た direct quantitative に よ り, all kinds of The disease に accompanied by changes in the content of う, etc., <s:1> 検 discuss が possible になる <s:1> と と examine えられる.

项目成果

Michinao Mizugaki: "Analysis of the eicosapentaenoic acid (EPA) metabolite Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α> in human plasma by GC/SIM using[ ^<18>O]Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>" Prostaglandins. 44. 317-327 (1992)

Michinao Mizugaki：“使用 [ ^<18>O]Δ^<17>-6- 通过 GC/SIM 分析人血浆中的二十碳五烯酸 (EPA) 代谢物 Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>酮-PGF_<1α>”前列腺素。44. 317-327 (1992)

Takanori Hishinuma: "Separation and concentration of Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α> using monoclonal antibody to ω3-olefin structure of trienoic prostanoids" Prostaglandins. 44. 329-338 (1992)

Takanori Hisinuma：“使用三烯类前列腺素的 ω3-烯烃结构的单克隆抗体分离和浓缩 Δ^<17>-6-keto-PGF_<1α>” 前列腺素 44. 329-338 (1992)。