REGULATION OF SQUALENE EPOXIDASE EXPRESSION AND THE ENZYME EVOLUTION

角鲨烯环氧酶表达的调控和酶的进化

基本信息

  • 批准号:
    04454155
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    1992
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1992 至 1993
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

We have succeeded in a cloneing of rat squalene epoxidase(RSE).This is the first presentation of mamalian SE.RSE polynucleotide deduced from nucleotide sequence ontains 573 amino acids(Mr. = 63,950 Da).The amino acid sequence reveals one potential transmembrane domain with a hydrophobic segment (Leu^<27> to Tyr^<43>) in the N-terminal region and beta_1-alphaA-beta_2 motif which is known to be the consensus for FAD binding domain. Thereis a moderate homology between the rat and the ERG1 gene encoding SE cloned from an allylamine-resistant Saccharomyces cerevisiae mutant. Expression of a full length RSE protein in Escherichia coli confirms this polypeptide is functional one.To prove RSE as an important rate llimiting enzyme of cholesterol biosynthetic pathway, we analayzed the cholesterol induced change of RSE activity, protein quantity and mRNA levels. Western blot analylsis revealed that lipoprotein deficient serum caused the induction of RSE in L929 cells. Northern bolt analysis supported that the induction occurred in the transcriptional level. In addition, we found the SRE(Sterol regulatory element)-like sequences in promoter region of the RSE gene. These results strongly suggest that RSE is regulated by cholesterol similar to the rate limiting enzyme, HMG-CoA reductase.A homology search in the GenBank data base indicated that the cDNA for RSE shows moderate nucleotide sequence similarity to allylamine-resistant Saccharomyces cerevisiae SE.We could not find any similarity to peroxidases as well as cyclooxygenase, lipooxygenases and cytochrome P-450 isozymes. Thus, the RSE may evolved from the distinct ancestral gene.
我们成功地克隆了大鼠角鲨烯环氧酶(RSE)。这是首次发现哺乳动物角鲨烯环氧酶(RSE)。从核苷酸序列推导出的RSE多核苷酸由573个氨基酸组成(Mr=63,950 Da)。氨基酸序列显示一个潜在的跨膜结构域,在N-末端有一个疏水片段(Leu^&lt;27&gt;to Tyr^&lt;43&gt;)和已知FAD结合域的共识的β_1-αA-β_2基序。这只大鼠与从耐烯丙基胺的酿酒酵母突变株中克隆的编码SE的ERG1基因有中等同源性。在大肠杆菌中表达的全长RSE蛋白证实了该多肽具有功能性。为了证明RSE是胆固醇生物合成途径中的一种重要限速酶,我们分析了胆固醇诱导的RSE活性、蛋白质含量和mRNA水平的变化。Western印迹分析表明,脂蛋白缺乏血清可诱导L929细胞产生RSE。Northern杂交分析支持该诱导发生在转录水平。此外,我们还在RSE基因的启动子区域发现了类固醇调节元件(SRE)的序列。这些结果有力地表明,RSE受胆固醇调节,类似于限速酶HMG-CoA还原酶。在GenBank数据库中的同源性搜索表明,RSE的cDNA与耐烯丙基胺的酿酒酵母SE具有中等的核苷酸序列相似性。我们没有发现与过氧化物酶以及环氧合酶、脂肪加氧酶和细胞色素P-450同工酶的相似性。因此,RSE可能是从不同的祖先基因进化而来的。

项目成果

期刊论文数量(36)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
榊原 順: "ラットスクアレン・エポキシダーゼcDNAの単離とその性状" 脂質生化学研究. 35. 131-134 (1993)
Jun Sakakibara:“大鼠角鲨烯环氧酶 cDNA 的分离及其特性”脂质生物化学研究 35. 131-134 (1993)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Jun Sakakibara: "Isolation of rat squalene epoxidase cDNA and its properties" JCBL. 35. 131-134 (1993)
Jun Sakakibara:“大鼠角鲨烯环氧酶 cDNA 的分离及其特性”JCBL。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Jun Sakakibara: "Squalence epoxidase as a rate limiting enzyme" "TANPAKUSHITU・KAKUSANN・KOUSO". 39, in press. (1994)
Jun Sakakibara:“Squalence 环氧酶作为限速酶”“TANPAKUSHITU·KAKUSANN·KUSO”39,出版中(1994 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
榊原 順: "ラットスクアレン・エポキシダーゼの構造と機能" 第15回日本分子生物学会年会報. 15. 200- (1992)
Jun Sakakibara:“大鼠角鲨烯环氧酶的结构和功能”第 15 届日本分子生物学会年报 15. 200- (1992)。
  • DOI:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Sakakibara,J.: "Molecular cloning and characterization of rat squalene epoxidase" Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91 in press. (1994)
Sakakibara,J.:“大鼠角鲨烯环氧酶的分子克隆和表征”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91 已出版。
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    $ 4.22万
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  • 批准号:
    06557135
  • 财政年份:
    1994
  • 资助金额:
    $ 4.22万
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  • 资助金额:
    $ 4.22万
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  • 财政年份:
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  • 资助金额:
    $ 4.22万
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    60480132
  • 财政年份:
    1985
  • 资助金额:
    $ 4.22万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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