PCR法による歯からのDNA型検出

使用PCR方法检测牙齿的DNA类型

• 批准号: 04454523
• 负责人: 竹井 哲司
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04454523/
• 关键词: 法医学; 歯からの個人識別; DNA多型分析; PCR(polymerase chain reaction); シングルローカスVNTR(MCT118); HLADQα

歯の各組織からDNAを抽出し、シングルローカスVNTR部位およびHLADQαを指標としてPCR法(polymerase chain reaction)によりDNAを増幅し、歯からのDNA型多型分析を行い、以下の知見を得た。1. まず、DNA分析の手技を習得するために、血液試料からDNAを抽出し、シングルローカスVNTR多型であるMCT118(D1S80)および多塩基置換多型であるHLADQαを指標としてPCR法によりDNAを増幅し、ついでポリアクリルアミドゲル電気泳動法によりMCT118の多型分析を、逆ドット・ブロット・ハイブリダイゼイション法によりHLADQαの多型分析を行ったところ、良好な成績を得ることができた。2. 歯を歯髄と硬組織に分け、硬組織は超音波洗浄後EDTAを用いて脱灰し(1週間)、それぞれについて蛋白分解、フェノール抽出、クロロホルム抽出、エタノール沈澱などの一連の実験方法によりDNAを抽出した。DNA量は新鮮歯髄で4〜6μg、陳旧歯髄で約1μg、硬組織で約2μg、歯石(21.5mg)で1μgであった。アガロース電気泳動により、新鮮歯髄からは高分子DNAが、その他では低分子DNAが抽出されていることがわかった。3. MCT118型については新鮮歯髄から検出することができるといえるが、電気泳動において非特異的なDNAの増幅がみられたりするので、引き続き検討していきたい。4. HLADQα型については新鮮歯髄から検出することができた。採取量の少ない歯髄および陳旧歯髄からはPCR法を2回繰り返すことにより検出することができた。硬組織および歯石からは検出できなかった。

DNA from each tissue was extracted and analyzed by polymerase chain reaction (PCR). The following results were obtained. 1. DNA analysis techniques acquisition, blood sample extraction, VNTR polymorphism, MCT118(D1S80), HLADQα polymorphism, PCR, DNA amplification, electrokinetic analysis, MCT118 polymorphism, reverse transcription, HLADQα polymorphism analysis Good results are obtained. 2. For hard tissue analysis, ultrasonic washing of hard tissue followed by EDTA deashing (within 1 week), protein decomposition, extraction, precipitation, and DNA extraction. DNA content varied from 4 to 6μg for fresh teeth, 1μg for old teeth, 2μg for hard tissues and 1μg for dental stones (21.5 mg). For example, if the DNA is extracted from the DNA, the DNA will be extracted from the DNA. 3. Type MCT118 is a new type of DNA that is not specific to DNA. 4. HLADQα-type Take the amount of time to change the PCR method. The hard tissue is hard and the stone is hard.