ラット腎チロシンホスファターゼのcDNAクローニング-腎炎発症・進展機能解明への応用

大鼠肾酪氨酸磷酸酶的cDNA克隆——在阐明肾炎发病和进展的功能中的应用

• 批准号: 04807044
• 负责人: 申 性孝
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807044/
• 关键词: チロシンホスファターゼ; 蛋白質チロシニリン酸化; 糸球体腎炎; 培養メサンギウム細胞; CDNAクローニング; 遺伝子発現; 組換えタンパク質

チロシンホスファターゼ間でよく保存された触媒ドメインの2ヶ所のアミノ酸配列に対応する推定オリゴヌクレオチドを作成し、これをプライマーとして用い、PCRを行なった。PCRの基質DNAとして、ラット腎RNAに逆転写酵素を反応させて得た一本鎖cDNAを用いた。得られたPCR産物をサブクローニングし、ジデオキシ法にて塩基配列を決定したところ、4種類のチロシンホスファターゼ部分cDNAが得られた。データベース検索により、うち2種類はマウスLRP、ヒトLARという既知のチロシンホスファターゼと95%以上の相同性を示したため、ラットのLRP、LARであると考えられた。他の2種類は、既知のチロシンホスファターゼ分子との相同性は低く 新種のチロシンホスファターゼと推定された(pP34-11,pP34-35)。4種のcDNAをプローベとしてラット各臓器より得たRNAに対しノーザンブロットを行なったところ、LRP、LAR P34-11は、腎に高発現がみられ、他に肝、心、肺、脾、脳にも発現がみられた。P34-35は脳にのみ発現していた。また、腎炎との関連を探る目的で、糸球体病変の主座であるメサンギウム細胞に着目し培養メサンギウムにおける遺伝子発現を検討したところ、発現のみられたものは LRPとP34-11の2種であった。これら2種類のチロシンホスファターゼの腎メサンギウム細胞における機能、役割を追求する目的で、全長cDNAのクローニングを行なった。それぞれPCR産物をプローべとし、ラット腎cDNAライブラリーをスクリーニングし、LRPは約3kbの全長cDNAを得、解析、報告した。新推チロシンホスファターゼに関しては、約2kbの全翻訳領域を含むcDNAを単純、解析を行ない、また大腸菌に発現させた組〓タンパク質を用いて本分子がチロシンホスファターゼ活性を有することを明らかにした。

The first step is to preserve the first step in the preparation of the second step in the preparation of the third step in the preparation of the second step in the preparation of the third step in the preparation of the second step in the preparation of the third step in the preparation of the second step in the preparation of the third step. PCR matrix DNA and RNA reverse transcription enzymes were used to obtain a cDNA sequence. The PCR products were identified by DNA sequencing and DNA sequencing. The two types of information are LRP, LAR and LRP, which are similar to each other. The identity of the two species, known species and molecules, is low and the new species is presumed (p34 -11, p34 -35). Four cDNAs were found in the liver, heart, lung, spleen and kidney. P34-35 is the most important part of the game. 2 species of LRP P34-11 were identified in the cell culture medium. To pursue the functions and services of these two types of cDNA in kidney support cells, full-length cDNA cloning has been carried out. The PCR product was cloned, analyzed and reported. The new DNA sequence contains about 2 kb of cDNA, which is purified, analyzed, and found in E. coli. The DNA sequence contains about 2 kb of cDNA, which is active in E. coli.

项目成果

Moriyama,T.et al.: "cDNA cloning of rat LRP,a receptor like protein tyrosine phosphatase and evidence for its gene regulation in cultured rat mesangial cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.188. 34-39 (1992)

Moriyama, T. 等人：“大鼠 LRP（一种类似蛋白酪氨酸磷酸酶的受体）的 cDNA 克隆及其在培养的大鼠系膜细胞中基因调控的证据”Biochem.Biophys.Res.Commun.188。