P-フラビンが結合した発光細菌ルシフェラーゼに関する研究(P-フラビンの生成機構および酸素添加反応の解明)

与P-黄素结合的发光细菌荧光素酶的研究（阐明P-黄素的产生机制和氧化反应）

• 批准号: 04808025
• 负责人: 笠井 佐夫
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04808025/
• 关键词: ルシフェラーゼ; 細菌ホロルシフェラーゼ; P-フラビン; NAD(P)H; NAD(P)H酸化還元酵素; モノオキシゲナーゼ

発光細箘V.harveyiのルシフェラーゼ遺伝子を導入した形質転換大腸菌からルシフェラーゼをDEAEセルロースカラムを用いて精製した。従来、細菌ルシフェラーゼは補因子の結合していない単純蛋白であるとされてきたが、精製したルシフェラーゼにはFMNおよびおそらくもう一つの補因子が結合しており、これをホロルシフェラーゼと命名した。本ホロルシフェラーゼに基質としてテトラデカナールを加えただけでは発光しないが、さらにNAD^+を加えると発光反応が進行することを発見し、その際P-フラビンが生成することを確認した。一方、ホロルシフェラーゼにテトラデカナールおよびNADHを加えるとNAD^+の場合よりはるかに強い発光がみられた。これらの結果は細菌ルシフェラーゼが発光反応を触媒するモノオキシゲナーゼであると同時に、NAD(P)H-FMN酸化還元酵素であることを示している。先に述べたようにホロルシフェラーゼにはFMN以外に補因子が結合していると考えられるが、吸収スペクトルから本補因子は非ヘム鉄ではないかと考え、ホロルシフェラーゼ中の鉄含量をICP発光分析法によって定量したところ、痕跡量の鉄が検出されたに過ぎなかった。したがって、本補因子は新規の低分子化合物と考えられ、その構造決定は興味ある研究対象と考えている。ホロルシフェラーゼにはNAD(P)H-FMN酸化還元活性があるので従来NAD(P)Hの発光法による定量には細菌ルシフェラーゼ以外にNAD(P)H-FMN酸化還元酵素を必要としたが、ホロルシフェラーゼを用いることにより本酵素単独でNAD(P)Hの定量が可能となったことは本研究で得られた成果の内特筆すべきものである。

The introduction of V. harveyi's DNA into E. coli and the purification of DEAE DNA The combination of the complementary factors of the bacteria and the FMN is very important for the purification of the pure protein. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. A party, a party The results of this study are as follows: 1. The enzyme NAD(P)H-FMN acidifying enzyme can be used as a catalyst for photodegradation. The iron content in the iron content of the iron in the iron content of the iron content of the iron content The structure of low molecular weight compounds is determined by the study of molecular weight factors. NAD (P) H-FMN Acidifying Reducers Activity in NAD (P) H