Cell biological studies on mechanisms of cell-to-cell movement of plant viruses

植物病毒细胞间运动机制的细胞生物学研究

基本信息

  • 批准号:
    05660046
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1993 至 1994
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Cell-to-cell movement of tobacco mosaic virus (TMV) and potato virus X (PVX) were investigated using methods of molecular cell biology. The results are as follows.1. The effects of deletion mutants in 30 k protein (movement protein) gene of TMV on cell-to-cell movement and localization of movement protein in tobacco protoplasts has been investigated. Cell-to-cell movement and localization of 30 k protein in protoplasts of 3 C-terminal amino acids deletion mutant indistiguishable from those of wild-type clone. When 33 C-terminal amino acids were deleted, virus moved slowly and lesser amounts of 30 k protein were found in the cytoplasms of protoplasts. Deletion of 77 C-terminal amino acids and residues from 9 to 142 at N-terminal abolish cell-to-cell movement and 30 k protein are not found in protoplasts, though virus particles aboundantly accumulated in protoplasts.2. We have developed a in situ hybridization method using digoxygenin labelled-RNA probes to monitor the localization of TMV-RNA in tobacco plants and protoplasts. We are carring out studies to investigate behavior of virus RNA during cell-to-cell movement of TMV using this in situ hybridization method.3. The 25 k protein which is part of the triple gene block of PVX are involved in cell-to-cell movement, In this experiment, we have used an E.coli expression system to produce significant amounts of 25 k protein. A polyclonal antiserum were produced using purified 25 k protein. An immunocytochemical analysis of infected tobacco leaves reveals the 25 k protein is exclusively associated with cytoplasmic inclusions in the cytoplasm of infected cells. These results indicate that the triple gene block proteins of PVX constitute a new class of movement protein.
采用分子细胞生物学方法研究了烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯X型病毒(PVX)的细胞间运动。结果如下:1。研究了烟草TMV 30k蛋白(运动蛋白)基因缺失突变体对烟草原生质体细胞间运动和运动蛋白定位的影响。c端氨基酸缺失突变体原生质体中30k蛋白的细胞间运动和定位与野生型克隆无明显区别。当缺失33个c端氨基酸时,病毒移动缓慢,原生质体细胞质中30k蛋白含量减少。在原生质体中没有发现77个c端氨基酸缺失和9 ~ 142个n端残基破坏细胞间运动和30个k蛋白,尽管病毒颗粒在原生质体中大量积累。我们建立了一种原位杂交方法,利用双氧素标记的rna探针来监测烟草植株和原生质体中TMV-RNA的定位。我们正在利用这种原位杂交方法研究病毒RNA在TMV细胞间运动过程中的行为。25k蛋白是PVX三基因块的一部分,参与细胞间的运动,在本实验中,我们使用大肠杆菌表达系统产生了大量的25k蛋白。用纯化的25k蛋白制备多克隆抗血清。对受感染烟叶的免疫细胞化学分析表明,25k蛋白仅与受感染细胞细胞质中的细胞质内含物相关。这些结果表明PVX的三重基因阻断蛋白是一类新的运动蛋白。

项目成果

期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
徐 雷新,細川大二郎,高松則之: "ジャガイモXウイルスの25kDタンパク質の抗体作製と細胞内局在" 日本植物病理学会大会. (平成5年4月)発表予定.
Leixin Xu、Daijiro Hosokawa、Noriyuki Takamatsu:“马铃薯 X 病毒 25kD 蛋白的抗体产生和细胞内定位”日本植物病理学会年会(1993 年 4 月)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
徐雷新、細川大二郎、高松則之: "ジャガイモXウイルスの25KDタンパク質の抗体作製と細胞内局在" 日本植物病理学会報. 60. 390 (1994)
Leixin Xu、Daijiro Hosokawa、Noriyuki Takamatsu:“马铃薯 X 病毒 25KD 蛋白的抗体产生和细胞内定位”日本植物病理学会通报 60. 390 (1994)。
  • DOI:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
徐 雷新、細川 大二郎、高松 則之、: "ジャガイモXウイルスの25KDタンパク質の抗体作製と細胞内局在" 日本植物病理学会報. 60. 390- (1994)
Leixin Xu、Daijiro Hosokawa、Noriyuki Takamatsu:“马铃薯 X 病毒 25KD 蛋白的抗体产生和细胞内定位”日本植物病理学会通报 60. 390- (1994)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Uehara, T.and Hosokawa, D.: "Distribution of tobacco mosaic virus RNA molecules in infected tobacco protoplasts revealed by in situ hybridization" Ann. Phytopath. Soc. Japan. 60. 649-657 (1994)
Uehara, T. 和 Hosokawa, D.:“通过原位杂交揭示受感染烟草原生质体中烟草花叶病毒 RNA 分子的分布”Ann。
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 作者:
  • 通讯作者:
Uehara,T.and Hosokawa,D.: "Distribution of tobacco mosaic virus RNA molecules in infected tobacco protoplasts revealed by in situ hybridizatio" Ann.Phytopath.Soc.Japan.60. 649-657 (1994)
Uehara,T. 和 Hosokawa,D.:“通过原位杂交揭示受感染烟草原生质体中烟草花叶病毒 RNA 分子的分布”Ann.Phytopath.Soc.Japan.60。
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