Molecular breeding of a toxic chemicals-degrading-bacterium

有毒化学品降解菌的分子育种

基本信息

  • 批准号:
    05660112
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1993 至 1995
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1. Soluble methane monooxygenase (sMMO) gene was cloned from a methane-utilizing bacterium, Methylocystis sp.M (strain M), and sequenced.(1) sMMO structural gene (about 6kb) and its promotor region were sequenced, and those were confirmed to be sMMO genes by comparing them with complemental DNA sequences derived from N-terminal amino acid sequences of purified sMMO in strain M.(2) Some characteristics were cleared as follows ;・ sMMO from strain M was related closely with those of methylosinus trichosporium OB3b and Methylococcus capsulatus Bath in DNA sequences and putative amino acid sequences.・ Metal-binding site in a active center of sMMO,high G/C content in the third letter of the used codons, and prothsetic groups binding site were confirmed in that DNA sequence.2. Plasmid pWM3 coding sMMO genes was introduced into E.coli. Trichloroethylene degradation activity was not detected in E.coli harboring pWM3, and no difference in lysates was observed between E.coli harboring pWM3 and host by SDS-PAGE.Hydroxylase, one of the components of sMMO,consisted with alpha 2 beta 2 gamma 2 subunits and requires ferric ion in the active center, indicating that the precise assembly of those subunits and a metal would be required to express hydroxylase activity.
1.从甲烷利用细菌M中克隆了可溶性甲烷单加氧酶(SMMO)基因,并进行了序列测定:(1)对mMMO结构基因(约6kb)及其启动子区域进行了测序,与菌株M中纯化的sMMO的N端氨基酸序列的互补DNA序列进行比较,确定为sMMO基因。·在该DNA序列中证实了sMMO活性中心的金属结合部位、所用密码子第三个字母中的高G/C含量以及原基结合部位。将编码sMMO基因的真核表达载体pWM3导入大肠杆菌。在含有pWM3的大肠杆菌中没有检测到三氯乙烯降解活性,并且通过SDS-PAGE观察到含有pWM3的大肠杆菌和宿主的裂解产物没有差异。羟基酶是sMMO的一个组成部分,由α2β2伽马2亚基组成,活性中心需要铁离子,这表明表达羟基酶活性需要这些亚基和金属的精确组装。

项目成果

期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
内山裕夫: "微生物機能の多様性" 別府輝彦, 526 (1995)
内山博夫:“微生物功能的多样性” Teruhiko Beppu,526(1995)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
内山裕夫: "微生物機能の多様性-メタン資化性菌と環境浄化-" 別府輝彦 編 学会出版センター, 526 (1995)
内山博夫:《微生物功能的多样性——甲烷同化细菌与环境净化》,别府照彦编,学会出版中心,526(1995)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
H.Uchiyama: Methane-utilizing bacteria and remediation of polluted site In : Biodiversity of Bacterial Functions T.Beppu (ed). Gakkai-Shuppan-Center, 43-56 (1995)
H.Uchiyama:利用甲烷的细菌和污染场地的修复,见:细菌功能的生物多样性 T.Beppu(编辑)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
内山裕夫・矢木修身: "揮発性有機塩素化合物を分解する微生物" バイオサイエンスとインダストリー. 52. 879-884 (1994)
Hiroo Uchiyama 和 Osumi Yagi:“分解挥发性有机氯化合物的微生物”生物科学与工业 52. 879-884 (1994)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
内山裕夫: "揮発性有機塩素化合物を分解する微生物" バイオサイエンスとインダストリー. 52. 879-884 (1994)
Hiroo Uchiyama:“分解挥发性有机氯化合物的微生物”生物科学与工业 52. 879-884 (1994)。
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    $ 1.34万
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