N-(9-アクリジニル)マレイミド蛍光検出による新しい超高感度酵素分析法の開発

开发一种使用 N-(9-吖啶基)马来酰亚胺荧光检测的新型超灵敏酶分析方法

• 批准号: 05660124
• 负责人: 鎌田 恒夫
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Jumonji Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660124/
• 关键词: N-(9-Acridinyl)-maleimide; Fluorometry; Enzymatic assay; Hydroperonide; Glutathione peronidase; Glutathione reductase; Cholinesterase; N-(9-Acridinyl)maleimide; Enzymotic assay; Hydnoperopide; Glutathione redilotase; Cholimesterase

申請者によって開発されたN-(9-アクリジニル)マレイミド(NAM)はスルフヒドリル(SH)基に特異的に反応して強い蛍光を発するSH検出試薬である。本研究は、グルタチオン(GSH/GSSG)などSH基の関与する酵素反応と、NAMによる蛍光分析とを組合せ、生体成分や酵素活性を高感度で測定することである。申請年度において、グルタチオンレダクターゼ活性とコリンエステラーゼ活性の高感度測定法を開発し、それぞれ研究発表した。(1)[グルタチオンレダクターゼ酵素活性の超微量測定法]NADPHの存在下、GSSGをGSHに還元する反応を解媒するグルタチオンレダクターゼ活性のNAM蛍光による高感度測定法を開発した。動物肝臓やヒト血しょうなどの生体成分に応用し、従来のNADPH紫外部吸収法を比較した。本法は、操作法の簡便性の点では、従来法と同等であるが、精度は2〜8倍、感度は、10〜50倍高く、多数の試料を高感度でスクリーニングする手段として実用性があることを報告した。(2)[コリンエステラーゼ活性の超微量測定法]肝機能の指標として測定されるコリンエステラーゼ活性のNAM蛍光による高感度測定法を開発した。動物肝臓やヒト血しょうなどの生体成分に応用し、従来のDTNB法と比較した。操作法は、従来法と同じく簡便であり、精度もほぼ同程度であるが、感度は50〜100倍高く、実用的な方法であることを報告した。

The applicant has developed N-(9-amino)-N-(NAM)-N-(SH)-N-(SH)-N-N-(SH)-N In this study, GSH/GSSG was used to determine the relationship between SH and enzyme activity, and NAM was used to analyze the combination of light, biological components and enzyme activity. Application for the development of a high sensitivity assay for the determination of activity in the medium and high temperature range (1)[Ultra-micro assay of enzyme activity in the presence of NADPH and GSSG was developed as a high sensitivity assay of enzyme activity in the presence of NADPH Comparison of NADPH UV absorption method for biological components of animal liver and blood This method is simple and easy to operate, accurate by 2 ~ 8 times, sensitive by 10 ~ 50 times, and sensitive to most samples. (2)[The development of NAM high sensitivity assay for liver function indicators Comparison of animal liver and blood components using DTNB method The operation method is simple, the accuracy is the same, the sensitivity is 50 ~ 100 times higher, and the method is used.

项目成果

Toshio Konno: "A Sensitive Fluorometric Assay of Cholinesterase Activity with N-(9-Acridinyl)maleimide" Analytical Sciences. 9. 870-874 (1993)

Toshio Konno：“用 N-(9-吖啶基)马来酰亚胺进行胆碱酯酶活性的灵敏荧光测定”分析科学。

TSUNEO KAMATA: "A Sensitive Fluorometric Assay of Glutathione Reductase Activity with N-(9-Acridinyl)maleimide" Analytical Sciences. 9. 867-870 (1993)

TSUNEO KAMATA：“用 N-(9-吖啶基)马来酰亚胺对谷胱甘肽还原酶活性进行灵敏荧光测定”分析科学。

Tsuneo Kamata: "A Sensitive Fluorometnic Assay of Glutathione Reductsse" Analytical Science. 9. 867-870 (1993)

Tsuneo Kamata：“谷胱甘肽还原酶的灵敏荧光测定”分析科学。

Toshio Konno: "A Sensitive Fluorometnic Assay of Cholinesterase Activity" Analytical Science. 9. 871-874 (1993)

Toshio Konno：“胆碱酯酶活性的灵敏荧光测定”分析科学。