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ラット海馬錐体細胞細胞におけるGABA_B作動性slow ISPSのゲート機構

大鼠海马锥体细胞GABA_Bergic慢ISPS门控机制

基本信息

批准号：
05670097
负责人：
緒方宣邦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アミノ酸性伝達物質であるgamma-アミノ酪酸(GABA)は抑制性伝達物質として無脊椎動物から哺乳類に至るまで広く存在する。GABAの受容体は古くから知られているクロールチャネルに結合したもの(GABA_A受容体)と、近年その性質が明らかにされつつあるGABA_B受容体がある。GABAB受容体は細胞外からのカルシウムイオンの電位依存性流入を抑制するシナプス前GABA_B受容体とカリウムチャネルの活性化により緩徐な膜過分極を引き起こすシナプス後GABA_B受容体に分けられる。GABA_B受容体結合カリウムチャネルは哺乳類中枢神経系において緩徐な時間経過を持つ抑制性シナプス電位(slow IPSP)を引き起こし、中枢神経興奮性の制御に重要な役割を担っている。GABA_B受容体結合カリウムチャネルによるslow IPSPは、これまで脳切片などの標本を用いて極小電極法により膜電位を記録することにより間接的にその性質が検討されてきた。しかしながら現在に至るまでそのチャネル活動を直接観察した実験は殆ど報告されておらず、GABA_B受容体結合カリウムチャネルの活性化によるシナプス活動の解析の大きな障害となっている。私は培養海馬錐体細胞にパッチクランプ法を適用し、GABA_B受容体結合カリウムチャネルおよびそれによって引き起こされるslow IPSPを記録し、その基本的性質を観察することを試みた。ラットやモルモット等の哺乳類の脳を素早く摘出し特定の脳部位を薄切切片として切出し、脳切片を作成し、海馬錐体細胞を単離培養した。パッチクランプにより、求心神経の電気刺激に応答したシナプス電位を観察した。微小ガラス電極により記録細胞とは別の神経細胞より発する神経線維を刺激することにより錐体細胞にシナプス電流が記録される。このシナプス電流の内、GABA_B受容体拮抗薬であるCGP-35348によって抑制されるコンポーネントをGABA_B受容体によるシナプス電流と考えることができる。このようにして同定されるGABA_B受容体活性化電流は非常に小さく、GABA_A受容体拮抗薬bicucullineによって抑制されるGABA_A受容体活性化電流の10分の1以下であった。現在、使用するラットを出来るだけ成熟したものを用いたり、ナイスタチン法をパッチクランプ法に併用するなどの工夫を行い、GABA_B受容体活性化電流を実験可能な大きさまで増強することに務めている。

GABA is an inhibitory substance that exists in invertebrates, mammals, and other animals. GABA receptor has been known to combine with GABA_A receptor since ancient times, and its properties have been clarified in recent years. GABAB receptors inhibit the potential-dependent influx of GABA_B receptors into the extracellular domain, and slow down the activation of GABA_B receptors. GABA_B receptor binding is responsible for the initiation of slow IPSP in mammalian central nervous system, and plays an important role in the control of central nervous excitability. The slow IPSP of GABA_B receptor binding is discussed in detail in this paper. The membrane potential of GABA_B receptor binding is recorded by the minimal electrode method. The activity of the GABA_B receptor binding to the host cell is directly monitored and reported. The application of the method of culture in hippocampal pyramidal cells, GABA_B receptor binding, slow IPSP recording, and basic properties of GABA_B receptor binding were investigated. Mammalian primes such as those from the hippocampus were extracted early and sliced into thin sections, and hippocampal pyramidal cells were cultured in isolation. The electrical stimulation of the heart is detected by the electric potential. Micro-electrode recording cells and pyramidal cells recording current Within this sinapus current, the GABA_B receptor antagonist CGP-35348 can inhibit the sinapus current caused by the GABA_B receptor antagonist. The GABA_B receptor activation current was very small, while the GABA_A receptor antagonist bicuculline inhibited the GABA_A receptor activation current by 10 minutes or less. Now, the use of the mature and mature method, the use of the time, GABA_B receptor activation current can be increased.