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ラット知覚ニューロンにおけるTTX非感受性ナトリウムチャネルの遺伝子工学的解析

大鼠感觉神经元 TTX 不敏感钠通道的基因工程分析

基本信息

批准号：
06670116
负责人：
緒方宣邦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

感覚受容器に加えられた様々な感覚刺激は、一次知覚ニューロンの軸索である知覚求心神経線維において、活動電位に変換されるが、活動電位は神経細胞膜に存在するナトリウム(Na)チャネルの興奮(開口)によってNaイオンが細胞内に流入することによって引き起こされる。従って、Naチャネルは感覚情報の処理において重要な役割を担っている。私たちは、一次知覚ニューロンにおいて、機能的にも薬理学的にも性質が極めて異なる、二つのタイプのNaチャネルが存在することを明らかにした。一つのタイプは従来から多くの興奮性細胞において観察されているもので、低濃度のテトロドトキシン(TTX)によって抑制され、速い活性化および不活性化のカイネティクスを持つチャネルである。もう一つのタイプは一次知覚ニューロンに特異的に存在し、高濃度のTTXによっても全く影響を受けず、チャネルカイネティクスも前者に比較して著しく遅い(TTX-非感受性Naチャネル)。TTX-非感受性Naチャネルは一次知覚ニューロンのうち、比較的小型で無髄神経線維を発するものに選択的に存在し、主に痛覚信号の処理を担っていると考えられる。通常のNaチャネル、即ちTTX-感受性のNaチャネルに関しては、既にクローニングが成功し、その一次アミノ酸配列が決定されている。しかしTTX-非感受性Naチャネルに関しては、まがその構造が決定されていない。そこで私たちはTTX-非感受性Naチャネルの機能に関して、遺伝子工学的方法を用いてその機能的側面を検討した。ラット後根神経節細胞よりメッセンジャーRNAを抽出し、それをアフリカ爪ガエルの卵母細胞に注入し、その発現を観察することを試みたが、これは後根神経節から得られるメッセンジャーRNAの総量が極めて少なく、卵母細胞に注入した時に、有意なナトリウム電流を発生することが出来ず、はかばかしい結果は得られなかった。そこで現在は、アプローチを変えて、既知のナトリウムチャネルよりオリゴヌクレオチドプローブを作成し、PCR法によりナトリウムチャネルの一部構造を増幅し、ノーザンブロット法により特異的ナトリウムチャネルの検出を行っている。

There are multiple sensory stimuli added to the sensory receptor, changes in the sensory nerve dimension in the axon of the primary sensory receptor, changes in the activity potential, and the activity potential is triggered by the excitation (opening) of the membrane (Na) of the nerve cell, such that Na ions flow into the cell. In the process of information processing, it is important to carry out the task. The nature of the function of the drug is extremely different, and the existence of the drug is obvious. A variety of excitatory cells are detected in the medium, low concentrations of TTX are inhibited, rapidly activated and inactivated. The first time TTX is detected, the presence of TTX is specific, and the high concentration TTX is affected by the whole process. The first time TTX is detected, the TTX is not sensitive. TTX-insensitive Nacogroup is responsible for the primary detection, detection, and processing of the primary pain signal, compared to the presence of a small, non-sensitive Nacogroup, and the selection of the primary pain signal. Usually, the sodium chloride group, i.e., TTX-sensitive sodium chloride group, is related to the success of the sodium chloride group, and the primary acid allocation is determined. TTX-non-responsive Na The function of TTX-non-sensitive DNA is related to the application of DNA engineering methods to explore the bottom of its function. The total amount of RNA extracted from root ganglion cells, injected into oocytes and detected in oocytes was extremely low, and the intentional current was generated when oocytes were injected into oocytes. Now, we can change the structure of the cluster, make the known cluster, increase the amplitude of a part of the structure of the cluster by PCR method, and make the specific cluster by PCR method.