毒素原性大腸菌の産生する変異LTによるLTのアジュバント活性発現の解析

产毒大肠杆菌产生的突变 LT 的 LT 佐剂活性表达分析

• 批准号: 05670269
• 负责人: 辻 孝雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670269/
• 关键词: 毒素原性大腸菌; 易熱性エンテロトキシル; コレラ毒素; アジュバント; 変異毒素; ADP-rihosipl Aransferuce

全世界で今尚下痢症にり患する5才以下の小児は7-10億に達し、その内500-1000万人が死亡している。その下痢原因菌として毒素原性大腸菌(ETEC)が20%を占める。ETECは下痢毒素LTを産生し、毒素のワクチン開発は急務とされている。一方LTはコレラ毒素と同様に、経口投与でアジュバント効果があると報告されている。しかし野性LTは下痢活性が強いため現在では利用範囲が少ない。そこで今回我々はより有効なアジュンバトタンパク質の作製に寄与する目的で本研究を企画した。その結果、Aサブユニットの1個のアミノ酸置換(E112X)により、下痢活性と共にアジュント活性が欠如することを明らかにした。本変異LTはADPリボシール基転移酵素活性が欠如していた。また本変異LTはCT,LTの活性増強作用をもつリボシル化因子(ARF)との相互作用は保たれ、Aサブユニットのニック、還元がARFとの相互作用に必須である事を明らかにしている。従ってアジュバント活性にADPリボシール基転移酵素が関与することを世界で初めて明らかにすることが出来た。これらの結果をもとに、ADPリボシール基転移酵素活性に影響すると思われるアミノ酸を色々のアミノ酸に置換することを試み、Glu112を構造上微小変換(Asp112、Gln112)しても同活性と同時にアジュバント活性が低下することを明らかにしている。一方他の色々の部分をアミノ酸変換する事により色々の部分的活性を持つ変異毒素を作成して、エイズウイルス抗原などを用い、アジュバント活性が保たれしかも下痢毒性の少ない、有効な変異毒素の作成を行っている。

Worldwide, diarrhea affects 700 - 100 million children under 5 years old, and 5 - 10 million people die. Toxinogenic Escherichia coli (ETEC) accounted for 20% of diarrhea. ETEC has been working on the production of toxin LT, and the development of toxin LT is urgent. A side of the toxin, the same, the The wild LT is active and active. Now it is not used. This paper aims to study the relationship between quality control and quality control. As A result, one of the three acid substitutions (E112X) in the A/C system was found to be inactive. The enzyme activity of this enzyme is very low. The interaction between ARF and CT,LT activity enhancement, A, B, C, T, T, The activity of ADP is related to the activity of the enzyme. As a result, the enzyme activity was affected by changes in the structure of Glu 112 (Asp 112, Gln112), and the enzyme activity was decreased by changes in the structure of Glu112 (Asp112, Gln112). The activity of one of the color components is maintained in the production of isotoxins, and the activity of the other component is maintained in the production of isotoxins.

项目成果

Takao Tsuji: "Construction of plasminds usefulifor production of the B subunit of cholera toxin and LT" Eur J Epidemiol. (in press). (1994)

Takao Tsuji：“构建可用于生产霍乱毒素 B 亚基和 LT 的纤溶酶”Eur J Epidemiol。

Moriko Akashi: "Production of heat-stable enterotoxin II by chicken clinical isolates of E.coli" FEMS.Microbiol.Lett.109. 311-316 (1993)

Moriko Akashi：“鸡临床分离大肠杆菌产生热稳定性肠毒素 II”FEMS.Microbiol.Lett.109。

Jeol Moss: "Interaction of ADP-ribosylation factor with E coli enterotoxin that contains an inactivating lysine 112 substitution" J.Biol.Chem.268. 6383-6387 (1993)

Jeol Moss：“ADP-核糖基化因子与含有失活赖氨酸 112 取代的大肠杆菌肠毒素的相互作用”J.Biol.Chem.268。

Kan Shida: "E coli heat-labile enterotoxin binding glycoprotein in a proteose-peptone fraction of bovine milk" J.Dairy Sci.(in press). (1994)

Kan Shida：“牛乳蛋白胨部分中的大肠杆菌不耐热肠毒素结合糖蛋白”J.Dairy Sci.（出版中）。

Takashi Inoue: "Amino acid sequence of heat-labile enterotoxin from chicken enterotoxigeni E.coli" FEMS.MIcrobiol.Lett.108. 157-162 (1993)

Takashi Inoue：“来自鸡肠毒素大肠杆菌的不耐热肠毒素的氨基酸序列”FEMS.MIcrobiol.Lett.108。