EHEC毒素が原因のHUSに対するヒト型モノクローナル毒素抗体治療薬の開発

人单克隆毒素抗体治疗肠出血性休克综合征的药物研制

• 批准号: 15K08478
• 负责人: 辻 孝雄
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K08478/
• 关键词: 腸管出血性大腸菌(EHEC); 致死毒素（Stx1と2）; 経鼻投与ワクチン; キメラ抗体; HUS治療薬; 毒素原性大腸菌; 易熱性エンテロトキシン（LT); HUS; 志賀毒素; ワクチン; モノクロール抗体

毒素原性大腸菌のLTの変異毒素と腸管出血性大腸菌(EHEC)の致死毒素（Stx2）誘導体をマウス経鼻投与し、2種のStx2中和モノクローナル抗体（No 75Ｄ9，No45）を分離した（MI、71、2015）。各MAbの遺伝子配列の決定後、遺伝子組換え技術によりヒト-マウス型のキメラ抗体を作成した。毒素とキメラ抗体の事前混合液を用い、Hela細胞によるin vitro中和実験を行った。その結果、No 75Ｄ9とNo 75Ｄ9キメラ抗体は、同程度にStx2を中和した。また、No45とNo45キメラ抗体も同様の結果が得られた。しかしNo75Ｄ9キメラ抗体の中和能力は、No45キメラ抗体より強力であった。また毒素とキメラ抗体混合液を、マウス腹腔内投与したin vivo中和実験を行った。その結果は、in vitro中和実験と同様の結果を得た。さらに、毒素をマウスに事前ipし、キメラ抗体をivした。その結果、毒素ip後30分以上抗体ivが遅れた場合、抗体中和効果が半減した。この傾向は、No75Ｄ90およびNo45の元抗体及びキメラ抗体での同等に認められた。またキメラ抗体のマウス血中clearanceを検討した。その結果、元のMAbに比べ、キメラ抗体の血中clearanceは高かった。以上の結果から、No75D9キメラ抗体は、No45キメラ抗体に比べ、中和能力が高く、臨床応用の可能性が高い。但し,マウスMAbに比べ、血中内安定度は低い。従って、抗生物質投与などで血中毒素濃度が急上昇する場合、抗生物質とキメラ抗体を同時ivする必要がある。

Isolate the LT isotoxin of Toxogenic Escherichia coli and the lethal toxin (Stx2) of Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) by nasal administration, and isolate the Stx2 neutralizing antibodies (No 75D9, No45)(MI, 71, 2015). After determining the sequence of each MAb, the sequence of MAb is changed into a sequence of MAb antibodies. Toxin antibody in advance mixture, Hela cells in vitro neutralization No 75D 9, No 75D, No 75D No45, No 45. No75D9 Antibody neutralization ability No45 Antibody The toxin was injected into the abdominal cavity and neutralized. The result is in vitro and the result is the same. This is the first time I've seen a virus. Results: Toxin ip 30 points or more after antibody neutralization results decreased by half This tendency is similar to that of No75D90 and No45 meta-antibodies and No75D90 and No 45 meta-antibodies The blood clearance test The results, the MAb ratio, the antibody clearance in the blood are high. The above results are: No75D9 antibody, No45 antibody, high neutralizing ability, high possibility of clinical use. However, MAb is lower than MAb, and blood stability is lower. When the concentration of toxin in blood increases rapidly due to the administration of antibiotics, it is necessary to simultaneously administer antibiotics and antibodies.

项目成果

ボツリヌスC型毒素の細胞内侵入に関わるエンドサイトーシス経路の解析

肉毒杆菌C毒素进入细胞的内吞途径分析

• 发表时间: 2015
• 作者: 塚本健太郎;幸田知子;辻孝雄
• 通讯作者: 辻孝雄

有満秀幸, 佐々木慶子, 辻孝雄

有满英行、佐佐木惠子、辻隆雄

• 发表时间: 2016
• 作者: 有満秀幸;佐々木慶子;辻孝雄
• 通讯作者: 辻孝雄

ボツリヌスC型神経毒素の細胞侵入経路と局在解析

C肉毒杆菌神经毒素的细胞进入途径及定位分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 塚本健太郎;幸田知子;辻孝雄
• 通讯作者: 辻孝雄

ボツリヌスC型毒素はクラスリン非依存的エンドサイトーシスにより神経細胞内に侵入する

C 型肉毒杆菌毒素通过不依赖网格蛋白的内吞作用进入神经元

• 发表时间: 2016
• 作者: 塚本健太郎;幸田知子;辻孝雄
• 通讯作者: 辻孝雄

Reassortment of Human and Animal Rotavirus Gene Segments in Emerging DS-1-Like G1P[8] Rotavirus Strains.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0148416
• 发表时间: 2016
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Komoto S;Tacharoenmuang R;Guntapong R;Ide T;Tsuji T;Yoshikawa T;Tharmaphornpilas P;Sangkitporn S;Taniguchi K
• 通讯作者: Taniguchi K