培養神経系細胞を用いたアルドース還元酵素発現調節因子の解析

使用培养的神经系统细胞分析醛糖还原酶表达的调节因子

• 批准号: 05680693
• 负责人: 西村 千尋
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680693/
• 关键词: アルドース還元酵素; 糖尿病; 培養神経系細胞; 発現調節; mRNA; イムノアッセイ

アルドース還元酵素はNADPHを補酵素としてグルコースをソルビトールという糖アルコールに変換する酵素である。本酵素を介するポリオールの代謝異常が糖尿病神経症をはじめとする種々の合併症の発症に関与することが近年明らかにされてきた。本酵素の生理的役割や酵素蛋白の発現調節機構は未だ不明であるが、糖尿病合併症の発症に関わる本酵素の発現調節機構を解明することは発症の予防と治療に重要と考えられる。そこで本研究では特に糖尿病による神経障害に着目し、ヒト培養神経系細胞における本酵素の発現調節について検討を行った。ヒト由来の神経系細胞株としてneuroblastoma由来のIMR-32,SCCH-26,GOTOとgliblastoma由来のA-172を用いた。まずアルドース還元酵素蛋白の発現を本研究者らが最近開発したイムノアッセイ法(Clin.Chem.in press)にて測定したころ、いずれの細胞でも本酵素を検出したが特にSCCH-26とA-172に高い発現を認めた。次にこれらの細胞を30mM glucose+1muM insulin或は150mM NaClを添加した培地にて8時間から7日間培養し、酵素量を測定した。その結果NaCl添加培地にてA-172においてのみ100倍近く酵素発現量が上昇することが見いだされた。この酵素発現の増加はNaClの濃度に依存的で、培養液を通常倍地に置き換えると経時的に下降することから可逆的であることがわかった。またNaClの代わりに250mMのソルビトールまたはラフィノースを添加した倍地でも同様の変化を認めたことから、A-172における本酵素の発現は浸透圧の上昇により誘導されることが示唆された。さらにヒト酵素cDNAプローブを用いたノザンブロット解析からこの酵素発現の変化はmRNAレベルの変化に起因すると考えられた。今後この発現調節機構を遺伝子レベルで解析し、糖尿病病態下でのアルドース還元酵素の発現調節についてさらに追究する予定である。

アルドース reducing enzyme はNADPH をsupplementing enzyme としてグルコースをソルビトールというsugar アルコールに変change するEnzyme である. This enzyme is used to treat metabolic abnormalities and diabetes mellitus syndrome. In recent years, るkind of comorbidity syndrome and することが have become clear. The physiological function of this enzyme and the regulation mechanism of the enzyme protein are not yet clear, and the symptoms of diabetes complications are unknown. The regulation mechanism of this enzyme is clearly explained and it is important to prevent and treat the disease. The purpose of this study is to study the effects of diabetes and neuropathy, and to culture neuroblastoma cells and to regulate the enzymes presently. IMR-32, SCCH-26, GOTO and gliblastoma origin of としてneuroblastoma origin and GOTO A-172 are used. The research on the reduction of enzyme protein by まずアルドースOur researcher, らが, recently developed the 発したイムノアッセイ method (Clin.Chem.in press), the determination of the enzyme, the cell enzyme, the enzyme, the SCCH-26, and the A-172 high-density enzyme are now recognized. The cells were cultured for 8 hours and 7 days after adding 30mM glucose+1muM insulin or 150mM NaCl, and the enzyme amount was measured.そのThe result of adding NaCl to the にてA-172 においてのみ is nearly 100 times the amount of enzyme, and the amount of enzyme has increased. The increase in enzyme activity depends on the concentration of NaCl and the normal times of the culture medium. The にることから when the きき is replaced by the えると経 is reversible.またNaClのdaiわりに250mMのソルビトールまたはラフィノースをaddedした多地でも同様の変化をIt is recommended that A-172 におけるenzyme be soaked in and immersed in the enzyme.さらにヒトzyme cDNA プローブを Use いたノザンブロット analysis からこThe cause of the change of the enzyme is the cause of the change of the enzyme. From now on, we will analyze the regulation mechanism of the remaining enzymes and restore enzymes under the condition of diabetes, and investigate and investigate.