嗅球におけるNO合成酵素およびMAPキナーゼ発現の分子制御機構-免疫組織化学、in situ PCR hybridizationならびにノーザン・ブロッティング法による解析

嗅球中 NO 合酶和 MAP 激酶表达的分子控制机制 - 通过免疫组织化学、原位 PCR 杂交和 Northern blotting 进行分析

基本信息

批准号：
07660389
负责人：
谷口和之
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

嗅球は嗅覚の一次中枢で主嗅球および副嗅球から成り、主嗅球は嗅上皮から、副嗅球は鋤鼻器からの投射を受ける。嗅上皮および鋤鼻器の感覚細胞は双極性のニューロンで、その軸索はそれぞれ主嗅球および副嗅球の表層に至って嗅神経層および鋤鼻神経層となってからその深部で糸球体とよばれる特殊な構造を形成する。嗅覚情報はこの糸球体で嗅球の固有ニューロンである僧帽細胞および房飾細胞へと伝達される。固有ニューロンの機能は糸球体を取り巻く傍糸球細胞、嗅球全体に散在する短軸索細胞、嗅球最深層に密在する顆粒細胞など、各種介在ニューロンによる調節を受ける。本研究ではまず、NO合成酵素と相同であるといわれるNADPH-ディアフォラーゼを酵素組織化学により、NO合成酵素はその抗体を用いた免疫組織化学により、またNO合成酵素に対するmRNAはそれと相補的な合成オリゴヌクレオチドを用いたin situ hybridizationにより検索した。NADPH-ディアフォラーゼの反応は短軸索細胞と副嗅球の顆粒細胞に強く認められ、また糸球体、傍糸球細胞、主嗅球の顆粒細胞にも中等度に認められた。一方、NO合成酵素に対する免疫組織化学およびin situ hybridizationでは反応およびシグナルはNADPH-ディアフォラーゼの場合とほぼ同様であったが、糸球体には認められなかった。従って、糸球体におけるNADPH-ディアフォラーゼの反応はNO合成酵素とは別の物質を捉えたものと考えられた。また、NO合成酵素は収穫伝導路において各種の介在ニューロンに発現して固有ニューロンの機能を抑制的あるいは促進的に調節していることが推測された。MAPキナーゼの発現およびin situ PCR hybridization技法の確立についてはいまだ検討中である。

嗅球是嗅觉感的主要中心，由主嗅球和辅助嗅球组成，辅助嗅球是从嗅觉上皮和辅助嗅球投射的主要嗅球和vonasal器官的辅助嗅球。嗅觉上皮和vonasal器官中的感觉细胞是双极神经元，其轴突到达主和辅助嗅球的表面，分别成为嗅觉和沃诺纳神经层，然后形成一种称为特殊的结构，称为特殊的结构。嗅觉信息在此肾小球中传播到二尖瓣细胞和簇状的装饰细胞，这些细胞是嗅球的地方性神经元。固有神经元的功能受各种神经元的调节，例如肾小球周围的副细胞，散布在整个嗅球中的短轴突细胞，以及在嗅球最深层的颗粒细胞。在这项研究中，我们首先搜索了NADPH-肌酶，据说该酶与无合酶是同源的，通过酶组织化学，使用抗体没有合成酶是免疫组织化学，并使用合成杂交的原位杂交使用合成的寡核苷酸对mRNA进行了辅助。在辅助嗅球的短轴突细胞和颗粒细胞中，强烈观察到了NADPH-肌酶反应，并在主要嗅球的肾小球，副胶质膜和颗粒细胞中适度观察到。另一方面，在免疫组织化学和与NO合酶的原位杂交中，反应和信号几乎与NADPH-二脑酶相同，但在肾小球中却不相同。因此，据认为，肾小球中NADPH-肾法酶的反应捕获了一种与NO合酶不同的物质。还可以推测，在收获传导道的各种神经元中没有任何合酶表达，并抑制或促进了内在神经元的功能。 MAP激酶的表达和原位PCR杂交技术的建立仍在考虑中。