好中球の活性酸素産生機序の組織化学的分子生物学的研究

中性粒细胞活性氧产生机制的组织化学和分子生物学研究

• 批准号: 07670021
• 负责人: 瀬口 春道
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kochi Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670021/
• 关键词: 好中球; 活性酸素; 分泌顆粒; NADPH oxidase; Alkaline phosphatase; GTPγS; GTP結合タンパク質; 脱顆粒

ヒト好中球は細菌感染に対し生体防御を行う重要な細胞で、活性酸素を産生し、殺菌作用を獲得することが知られている。好中球における活性酸素産生機序と刺激応答について検討を行った。ヒト好中球には特殊顆粒、アズ-ル顆粒以外に、最近、これらの顆粒とは全く異なるゼラチナーゼ顆粒、分泌顆粒が存在することが知られている。特に分泌顆粒はアルカリ性ホスファターゼ(ALPase)活性があり、ホルボールエステルや走化性ペプチドによる細胞刺激により互いに癒合し、最終的に細胞膜と癒合し脱顆粒する。細胞膜をカチオン化フェリチンやネイチブフェリチンで標識し、NADPH oxidase活性をSteinbeckらのDAB/Mn法により検出し、活性酸素の産生部位を検出した所、未刺激では細胞質内に広く分布する短桿状の分泌顆粒にこの酵素活性が局在し、細胞刺激により脱顆粒した。Ce塩を捕捉剤とするALPase活性の検出とNADPH oxidase活性の検出を同時に行うとこれらの酵素は共に分泌顆粒に局在することが判明した。これらの所見は、従来細胞膜に活性酸素の産生部位があるとする説とは異なり、細胞刺激により、先ず活性酸素は細胞質内の分泌顆粒で産生されることが明らかとなった。次に、NADPD oxidaseの活性化に不可欠なGTP結合タンパク質の活性化を検討するため、GTPγS処理を行って活性酸素の産生部位の動態を組織化学的に観察した所、分泌顆粒は互いに融合し、最終的に細胞膜と癒合し脱顆粒を惹起することが観察された。このことよりGTPγSによりGTP結合タンパク質が活性化され、分泌顆粒に存在するチトクロームb558に結合し、また、プロテインキナーゼCの活性化によるp47phoxのリン酸化とp67phoxの結合を促し、NADPH oxdaseを活性化し、活性酵素を産生することを示している。

The bacteria are important for organism defense, and the production of active acids and vitamins is important for understanding. The mechanism of active acid production and stimulation in the brain are discussed in detail. In addition to the special particles, the nearest particles, the whole particles, the secretory particles exist. The secretion of special granules is characterized by high activity, high activity, high chemical activity, cell stimulation, mutual healing, and finally cell membrane healing. The cell membrane was identified by NADPH oxidase activity by Steinbeck DAB/Mn method, and the active acid production site was detected. The enzyme activity was detected by short rod-shaped secretory granules distributed in the cytoplasm without stimulation. The activity of NADPH oxidase was detected in the cells of the cells. The results showed that the production site of active acid in cell membrane was different from that in cell stimulation, and the production of active acid in cytoplasm was different. In addition, the activation of NADPH oxidase can not be detected by histochemical examination of the dynamics of GTP binding protein activation, GTPγS treatment and active protein production site, and the fusion of secretory granules and the initiation of cell membrane healing granules. This indicates that GTPγS binds to p558, activates p47 phox, activates NADPH oxidase, and produces active enzymes.

项目成果

寺島正子ら: "全身照射マウス肝におけるアポトーシス発現の経時的変化。" 日本医放会誌. 55. 700-702 (1995)

Masako Terashima 等人：“全身照射小鼠肝脏细胞凋亡表达的时间变化。”日本医学无线电协会杂志 55. 700-702 (1995)。

瀬口春道: "金属塩を用いた組織化学の原理と方法 電顕酵素組織化学 組織細胞化学1995 日本組織細胞化学会編" 学際企画, 198 (1995)

Harumichi Seguchi：“使用金属盐的组织化学的原理和方法、电子显微镜酶组织化学、组织细胞化学 1995 年，日本组织细胞化学学会编辑”跨学科项目，198（1995）

Y. Shiraishi et al.: "Expression of mucinous ovarian canoer antigen in hybrid cells derived by fusing a maalignantly transformed Bloom syndrome cell line (BS-SHI-4M OVC-MU) and mouse cell line." Intn. J. Oncol.7. 1275-1278 (1995)

Y. Shiraishi 等人：“通过融合恶性转化的布卢姆综合征细胞系 (BS-SHI-4M OVC-MU) 和小鼠细胞系而衍生的杂交细胞中粘液性卵巢癌抗原的表达。”

H. Seguchi and T. T. Kobayashi: "Effect of GTP S on the exocytosis of alakaline phosphatase-containing granules in human netrophils." Proc. 12. Intn. Symp. Morphol. Sci.62-63 (1995)

H. Seguchi 和 T. T. Kobayashi：“GTP S 对人中性粒细胞中含有碱性磷酸酶的颗粒的胞吐作用的影响”。

H. Seguchi and T. Kobayashi: "Initial superoxide production is carried out in alkaline phosphatase-positive granules in human neutrophils." Proc. 8. China-Japan Joint Seminar EM. 63-64 (1995)

H. Seguchi 和 T. Kobayashi：“最初的超氧化物产生是在人类中性粒细胞的碱性磷酸酶阳性颗粒中进行的。”