増殖細胞核抗原(PCNA)の多重免疫染色法の開発:抗原性の賦活化とその応用

增殖细胞核抗原（PCNA）多重免疫染色方法的开发：抗原激活及其应用

• 批准号: 07670024
• 负责人: 江崎 太一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670024/
• 关键词: 増殖細胞; PCNA; 固定; 抗原性賦活化; 酵素処理; マイクロウエーブ; 多重免疫染色; 免疫組織化学

固定や保存の条件によって影響を受けやすい増殖細胞核抗原(PCNA)とその他の重要な細胞や組織成分のマーカーとを組織の同一切片上で多重で免疫染色する方法を開発し、in situレベルでの増殖細胞の局在とそのフェノタイプの検索、他のマーカーとの位置的相互関係の解析を試みた。固定条件の設定:ラット各組織の凍結切片及びパラフィン切片を用いて、様々な固定条件下(固定液、固定時間とその温度など)におけるPCNA染色の比較検討をすると、パラフォルムアルデヒド系固定液でできるだけ短期間固定したもののみが染色性を示した。これに対して、より強い固定条件や、逆に未固定や通常のアセトン固定などでは全く染色できなかった。2.抗原性の賦活化(unmasking):上記の固定条件の中で、固定によりPCNAの抗原性が一度失われたものでも、賦活化を行うことにより、PCNAの免疫反応性が多少とも改善できる事がわかった。賦活化効果の最も強かったのは単純加熱やマイクロウェーブによる高温処理で、次いでペプシン処理がこれらに続いた。ただし、賦活化が強すぎるとバックグランド染色も強くなった。3.PCNAと他のマーカーとの多重免疫染色:各細胞の膜抗原やレセプター、細胞接着因子、ビメンチン、IV型コラーゲン線維などについても上記1と2の検索を同時に進め、それらの至適染色条件下において、PCNAとの多重免疫染色を行なった。以上のように、適切な固定条件と適度な賦活化を行なうことによって、従来から免疫染色の難しかったPCNAをはじめ、色々な抗原どうし間での多重免疫染色の可能性が見い出せた。現在、賦活化によるバックグランドを軽減するべく、賦活化の至適条件の検討を続けている。

To develop a method for multiple immunostaining of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and other important cellular and tissue components on the same tissue section under the influence of fixation and preservation conditions, and to try to analyze the relationship between PCNA and other important cellular and tissue components in situ. Setting of fixation conditions: frozen sections and frozen sections of various tissues were used in the study. Comparison of PCNA staining under fixation conditions (fixative, fixation time, and temperature) was performed. This is the first time that we've had a problem with this. We've had a problem with this. 2. Antigenicity and unmasking: In the immobilizing conditions mentioned above, PCNA antigenicity was lost once, PCNA immune reactivity was improved once, PCNA immune reactivity was activated once, PCNA immune reactivity was improved once. The most important part of activation is pure heating, high temperature treatment and secondary treatment. The color of the dye is strong, and the dye is strong. 3. Multiple immunostaining of PCNA and other proteins: membrane antigen, adhesion factor, cytokeratin, type IV cytokeratin, cytokeratin, The possibility of multiple immunostaining for PCNA was found when the above conditions were appropriate for fixation and activation. Now, the activation of the machine to reduce the number of, activation of the appropriate conditions for the discussion

项目成果

Taichi Ezaki: "The identification of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) on rat tissue cryosections and its application to double immunostaining with other markers." Arch.Histol.Cytol.58. 103-115 (1995)

Taichi Ezaki：“大鼠组织冰冻切片上增殖细胞核抗原 (PCNA) 的鉴定及其在与其他标记物双重免疫染色中的应用。”