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慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究

慢性肉芽肿病基因治疗基础研究

基本信息

批准号：
07670517
负责人：
布井博幸
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670517/
关键词：
慢性肉芽腫症遺伝子治療 Retrovirus Vector

项目摘要

我々慢性肉芽腫症患者で欠損しているNADPH oxidaseの各構成蛋白について研究しており、モノクローナル抗体作成、無細胞系での活性測定、患者病型分類や遺伝子解析など臨床的な調査を行ってきた。また同時に遺伝子治療の基礎的研究として、アデノウイルス、レトロウイルス等の試みをしてきた.今回,癌化学療法センター杉本芳一博士と共同研究で、in vivo selectionが唯一可能な多剤耐性遺伝子であるMDR1とIRES (Internal Ribosomal Entry Site)を組み込んだbicistronicなpHa-MDR Retrovirus vectorにgp91-phox,p47-phox,P67-phox cDNAを組み込んだ。作成した各plamidをPA317packaging cellへtransfectして、vincristineで耐性になった細胞をクローニングし,さらにこの細胞培養上清を3T3 cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSやWester blottingで確認した。各構成蛋白を発現しているウイルス産生PA317細胞をクローニングし、その培養上清のウイルスタイタ-を3T3 cellで測定し3-5x10^4pfu/ml程度のウイルス産生を確認した。この培養上清を患者抹消血から樹立したEB virus established B cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSまたはWestern Blottingで確認すると同時にgp91-およびp47-phox導入細胞では活性酸素産生の再構築が得られた.今後、マウスを用いてこのウイルスベクターの有用性と安全性を確認していこうとしている

In our chronic granulomatosis patients, we do not have enough NADPH oxidase to study the production of antibodies, the production of antibodies, the determination of the activity of cell lines, and the classification of disease types of patients. At the same time, the study of the basic principles of the treatment of children and children at the same time, such as the study of the basis for the treatment of children at the same time, such as the study of the basis of medical treatment. This time, cancer chemistry has been studied jointly by Dr. Fang Sugimoto, and the only possible multi-endurance IRES (Internal Ribosomal Entry Site) in in vivo selection has been detected in bicistronic, pHa-MDR Retrovirus vector, gp91-phox,p47-phox,P67-phox cDNA. Make each plamid, PA317packaging cell, transfect, vincristine, endurance, cell cycle, cell culture, 3T3 cell infection, protein formation, FACS, Wester blotting, and so on. The levels of PA317 cells in each protein group were measured at the level of 3-5x10 ^ 4pfu