慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究
慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究
慢性肉芽肿病基因治疗基础研究
批准号：
07670517
负责人：
布井 博幸
金额：
$1.41万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1995 至 --
中文摘要
翻译
我々慢性肉芽腫症患者で欠損しているNADPH oxidaseの各構成蛋白について研究しており、モノクローナル抗体作成、無細胞系での活性測定、患者病型分類や遺伝子解析など臨床的な調査を行ってきた。また同時に遺伝子治療の基礎的研究として、アデノウイルス、レトロウイルス等の試みをしてきた.今回,癌化学療法センター杉本芳一博士と共同研究で、in vivo selectionが唯一可能な多剤耐性遺伝子であるMDR1とIRES (Internal Ribosomal Entry Site)を組み込んだbicistronicなpHa-MDR Retrovirus vectorにgp91-phox,p47-phox,P67-phox cDNAを組み込んだ。作成した各plamidをPA317packaging cellへtransfectして、vincristineで耐性になった細胞をクローニングし,さらにこの細胞培養上清を3T3 cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSやWester blottingで確認した。各構成蛋白を発現しているウイルス産生PA317細胞をクローニングし、その培養上清のウイルスタイタ-を3T3 cellで測定し3-5x10^4pfu/ml程度のウイルス産生を確認した。この培養上清を患者抹消血から樹立したEB virus established B cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSまたはWestern Blottingで確認すると同時にgp91-およびp47-phox導入細胞では活性酸素産生の再構築が得られた.今後、マウスを用いてこのウイルスベクターの有用性と安全性を確認していこうとしている
英文摘要
我々慢性肉芽腫症患者で欠損しているNADPH oxidaseの各構成蛋白について研究しており、モノクローナル抗体作成、無細胞系での活性測定、患者病型分類や遺伝子解析など臨床的な調査を行ってきた。また同時に遺伝子治療の基礎的研究として、アデノウイルス、レトロウイルス等の試みをしてきた.今回,癌化学療法センター杉本芳一博士と共同研究で、in vivo selectionが唯一可能な多剤耐性遺伝子であるMDR1とIRES (Internal Ribosomal Entry Site)を組み込んだbicistronicなpHa-MDR Retrovirus vectorにgp91-phox,p47-phox,P67-phox cDNAを組み込んだ。作成した各plamidをPA317packaging cellへtransfectして、vincristineで耐性になった細胞をクローニングし,さらにこの細胞培養上清を3T3 cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSやWester blottingで確認した。各構成蛋白を発現しているウイルス産生PA317細胞をクローニングし、その培養上清のウイルスタイタ-を3T3 cellで測定し3-5x10^4pfu/ml程度のウイルス産生を確認した。この培養上清を患者抹消血から樹立したEB virus established B cellに感染させ、各構成蛋白の発現をFACSまたはWestern Blottingで確認すると同時にgp91-およびp47-phox導入細胞では活性酸素産生の再構築が得られた.今後、マウスを用いてこのウイルスベクターの有用性と安全性を確認していこうとしている
期刊论文(9)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
登录
查看更多内容
Kobayashi.S Nunoi.H etal: "Characterization of superoxide-generating system in human peripheral lymphocytes and lymphoid cell lines." J.Biochem. 117. 758-765 (1995)
Kobayashi.S Nunoi.H 等人：“人外周淋巴细胞和淋巴细胞系中超氧化物生成系统的特征。”
Kobayashi.S Nunoi.H 等人：“人外周淋巴细胞和淋巴细胞系中超氧化物生成系统的特征。”
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
布井博幸、金ケ崎士朗: "羊土社 実験医学(GTP結合蛋白質)" 食細胞におけるRacとNADPHオキシダーゼ. 2 (1995)
Hiroyuki Nui、Shiro Kanegasaki：“Yodosha Experimental Medicine（GTP 结合蛋白）”吞噬细胞中的 Rac 和 NADPH 氧化酶 2 (1995)。
Hiroyuki Nui、Shiro Kanegasaki：“Yodosha Experimental Medicine（GTP 结合蛋白）”吞噬细胞中的 Rac 和 NADPH 氧化酶 2 (1995)。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
Miyamoto.D Nunoi.H: "Analysis of the NADPH oxidase components during differentiation of HL-60 cells to eosinophilic lineage." Biochem.Biophys Acta. 1224. 11-16 (1994)
Miyamoto.D Nunoi.H：“HL-60 细胞分化为嗜酸性细胞谱系过程中 NADPH 氧化酶成分的分析。”
Miyamoto.D Nunoi.H：“HL-60 细胞分化为嗜酸性细胞谱系过程中 NADPH 氧化酶成分的分析。”
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
Shinagawa.T Nunoi.H,et al: "Induction of CD40 in Promyelocytic HL60 Cells Cultured with Retinoic acid/or Various Cytokines." J.Biochem. 118. 534-540 (1995)
Shinakawa.T Nunoi.H 等人：“用视黄酸/或各种细胞因子培养的早幼粒细胞 HL60 细胞中 CD40 的诱导”。
Shinakawa.T Nunoi.H 等人：“用视黄酸/或各种细胞因子培养的早幼粒细胞 HL60 细胞中 CD40 的诱导”。
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
Azuma.H Nunoi.H, etal: "A new mutation in exon 12 of the gp91-phox gene leading to cytochrome b-positive X-linked chronic granulomatous disease." Blood. 86. 3274-3277 (1995)
Azuma.H Nunoi.H 等人：“gp91-phox 基因外显子 12 的新突变导致细胞色素 b 阳性 X 连锁慢性肉芽肿病。”
Azuma.H Nunoi.H 等人：“gp91-phox 基因外显子 12 的新突变导致细胞色素 b 阳性 X 连锁慢性肉芽肿病。”
DOI：
--
发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
共 8 条
慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的研究
-
批准号：08670511
-
项目类别：Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
-
资助金额：$1.47万
-
财政年份：1996
-
负责人：布井 博幸
-
依托单位：
海外基金