α-グルコシダーゼcDNA導入細胞を用いた糖原病II型の遺伝子治療

使用导入α-葡萄糖苷酶cDNA的细胞进行II型糖原贮积病的基因治疗

• 批准号: 07670730
• 负责人: 臼杵 扶佐子
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670730/
• 关键词: 糖原病II型; acid α-glucosidase(GAA); cDNA; 筋芽細胞; 遺伝子治療; 細胞移入

糖原病II型を対象として、筋芽細胞を用いた治療法の開発を目標とした研究を行った。糖原病II型の欠陥酵素であるacid α-glucosidase(GAA)は高分子前駆体として合成され、一旦細胞外へ分泌された後、再び細胞内へとりこまれmature typeへと変換される。正常筋芽細胞と欠陥筋芽細胞を混合培養しhybrid myotubeを形成させGAA活性を測定したところ、欠陥細胞の酸素活性の上昇がみられた.従って、正常細胞からのGAA全駆体が疾患細胞へとりこまれprocessingをうけていることが考えられた。正常細胞の割合を少なくし、導入細胞あたりの酵素発現を高める必要があるが、そのためには自家筋芽細胞にGAAcDNAを導入して酵素活性の高いcell lineを得る方法が考えられる。また、GAAの分泌が継続されるためには、このcell lineは融合して筋管細胞へと分化する必要がある。そこで、マウス筋芽細胞のcell lineであるC2C12へvectorとして用いるpSRD plasmidとマーカー遺伝子であるpSV2-neoをco-transfectionし、G418-resistant cell lineを得た。このcell lineを用いて、分化度の検討を行った。筋関連遺伝子の発現をRT-PCR法で、また筋管細胞の形成度を筋組織化学的に検討した。分化融合培地へ変換後、筋関連遺伝子であるmyogenin, cardiac α-actinの発現は、経時的に増強した。この変化はparental C2C12 cellと同様であった。また、多核である筋管細胞の形成も経時的に増加した。したがってpSRD plasmid導入後も筋分化が進行することが確認された。GAAcDNA導入に関しては検討中である。

The aim of this study is to develop a new method of treatment for type II diabetes mellitus. Glycogen disease type II deficiency enzyme is acid α-glucosidase(GAA), which is synthesized from polymer precursors, secreted outside the cell, and then converted into intracellular mature type enzymes. The growth of GAA activity in normal and immature muscle cells was determined by mixed culture. The GAA is the whole body of a normal cell, and a diseased cell. There are many ways to achieve less cleavage of normal cells, higher enzyme production when introduced into cells, and higher enzyme activity in cell lines when GAAcDNA is introduced into muscle and bud cells. The secretion of GAA is necessary for cell line fusion and differentiation. C2C12-vector, pSV2-neo, co-transfection, G418-resistant cell line The cell line is used in the middle, and the differentiation is discussed. Detection of tendon related genes by RT-PCR and histochemical analysis of tendon cell formation After the transformation of differentiation, integration and cultivation, the discovery of muscle-related genes such as myogenin and cardiac α-actin has become stronger over time. C2C12 cell is the same as C2C12 cell. In addition, the formation of multi-nucleated tendon cells increased. The pSRD plasmid was introduced and the differentiation was confirmed. GAAcDNA is introduced into the system.

项目成果

臼杵扶佐子ら: "酸性マルターゼ欠損のないリソゾームグリコーゲン蓄積症" 日本臨床. 53. 3050-3054 (1995)

Fusako Usuki 等：“不伴有酸性麦芽糖酶缺乏的溶酶体糖原贮积症”日本临床研究 53. 3050-3054 (1995)。

Usuki F et al.: "Up-regulation of dystrophin mRNA by exposure to dibutyryl cAMP in the C2C12 muscle cell line." Biochem Biophys Res Comm. 210. 654-659 (1995)

Usuki F 等人：“C2C12 肌肉细胞系中暴露于二丁酰 cAMP 上调肌营养不良蛋白 mRNA。”