環境中に極めて低濃度で存在する芳香族塩素化合物の微生物による無機化技術の開発

环境中极低浓度芳香氯化合物的微生物矿化技术开发

• 批准号: 07680602
• 负责人: 片山 新太
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680602/
• 关键词: PCR法; 土壌DNAの抽出; PCP(ペンタクロロフェノール); pcpB遺伝子; 基質添加効果; pcp分解菌; PCP分解活性; Flavobacterium属菌

本研究は、土壌から直接DNAを抽出し定量的PCR法によって増幅しペンタクロロフェノール(PCP)資化性菌を推定し、菌数を増加させPCP無機化活性を高めるのに適した土壌への添加基質を明らかにすることを目的とした。1)土壌中のDNAの定量的PCR法の確立:PCP分解遺伝子(pcpB)のシークエンスをDNAデータベースとe-mail/DDBJを用いて比較し、最も特異性の高いプライマーを2組設計した。土壌中のDNAは、ドデシル硫酸ナトリウム入り緩衝溶液を用い凍結-融解法で抽出した。アガロースゲル電気泳動によりキメラDNAの可能性の高い10Kb以下のDNA断片を除いた後、スパンカラムで精製した。得られた土壌DNAをPCR法により増幅したところ、予想される大きさの増幅バンドが見られた。pcpB遺伝子を持つFlavobacterium属菌を土壌に添加し、そのpcpB遺伝子の増幅バンドを得るのに成功した。2組のプライマーでnested PCR法を用いることも可能となり、感度が高く培養法(4週間必要)に較べて迅速な(1日)分解菌の検出法が確立した。2)各種基質の添加のPCP資化性菌数への影響:有機物添加により、PCP分解菌数は減少した。3)分解速度の促進 一方、各種有機物の添加により、PCP分解速度は促進された。このことより、PCP分解菌は、土壌への基質添加により活性化されることが明らかとなった。以上より、土壌のPCP分解活性は、基質の添加によって高まるものの、それはPCP分解菌数の増加によるものではなく分解菌の活性化によることが明らかにされた。分解菌数と分解活性が必ずしも相関しないことが今後のバイオレメディエーション技術における重要課題であることが明らかにされた。

は this study, soil 壌 か ら direct DNA を drew し quantitative PCR method に よ っ て rights of し ペ ン タ ク ロ ロ フ ェ ノ ー ル presumption (PCP) endowment nature bacteria を し, bacterium number を raised さ せ PCP high inorganic chemical active を め る の に optimum し た soil 壌 へ の add matrix を Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. 1) in the soil 壌 の の の DNA quantitative PCR method established: traces of PCP decomposition 伝 child (pcpB) の シ ー ク エ ン ス を DNA デ ー タ ベ ー ス と E-mail/DDBJ を with い て し, most も high specificity の い プ ラ イ マ ー を 2 group design し た. DNA ナトリウム and ドデシ from soil are dissolved in <s:1> buffer solution を and then extracted by で freeze-thaw method で. ア ガ ロ ー ス ゲ ル electric 気 swimming に よ り キ メ ラ DNA likely の の い under 10 KB の DNA fragment を except い た, ス パ ン カ ラ ム で refined し た. Have ら れ た soil 壌 を DNA PCR method に よ り rights of し た と こ ろ, to want to さ れ る big き さ の rights of バ ン ド が see ら れ た. PcpB posthumous son 伝 を hold つ Flavobacterium belongs to bacterium を soil 壌 に add し, そ の pcpB heritage 伝 son の rights of バ ン ド を must る の に successful し た. Two groups の プ ラ イ マ ー で を nested PCR method with い る こ と も may と な り, sensitivity high が く culture method (4 weeks) necessary に more べ て な quickly (1) decomposition microbes の が 検 out method to establish し た. 2) The influence of <s:1> addition of various substrates on the number of pCP-oxidizing bacteria へ <e:1> : the addition of organic matter によ and the number of pCP-decomposing bacteria へ decrease た た. 3) The decomposition rate <s:1> promotes one side, the addition of various organic substances <s:1> によ によ, and the decomposition rate of PCP によ promotes された. <s:1> <s:1> とよ とよ とよ, pCP-decomposing bacteria, and soil へ <e:1> substrate with the addition of によ <e:1> to activate される とが とが とが and ら ら となった. Above よ り, soil 壌 の PCP decomposition activity は, matrix の add に よ っ て high ま る も の の, そ れ は PCP decomposing bacteria Numbers is の raised に よ る も の で は な く decomposition microbes の activeness に よ る こ と が Ming ら か に さ れ た. Bacteria number と が decomposition activity will ず し も phase masato し な い こ と が future の バ イ オ レ メ デ ィ エ ー シ ョ ン technology に お け る important topic で あ る こ と が Ming ら か に さ れ た.