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海馬CA3神経細胞と嗅内皮質第2層神経細胞に発現する分子EH1の構造と機能の解析

海马CA3神经元和内嗅皮层2层神经元表达的EH1分子的结构和功能分析

基本信息

批准号：
07680818
负责人：
玉卷伸章
金额：
$ 1.6万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680818/
关键词：
海馬嗅内皮質 in situハイブリダイゼーション差分法

项目摘要

我々は、ラット海馬で神経細胞軸索投射領域と完全に一致する細胞標識分子を求めて、海馬のCA3とCA1の二領域間で、一方の領域に特異的な分子を探してきた。これまでに、Subtraction法を用いることにより、海馬CA3の神経細胞と嗅内皮質第2層神経細胞の2領域に、特に強く発現する新たなcDNA配列の分子を発見し、EH1(Entorhino-Hippocampal specific protein 1)と命名した。嗅内皮質第2層神経細胞は海馬に投射し、歯状回とCA3領域の神経細胞にシナプスを形成する。EH1は、嗅内皮質第2層神経細胞とCA3領域の神経細胞間にシナプスを形成させる標識分子である可能性がある。in situハイブリダイゼイションをディゴシキゲニン標識で行い、これまでに18日目胎児、生後直後、成体ラットの大脳で行ってきたが、感度を上げてさらに広く全身で、それぞれの時期に、in situハイブリダイゼイションを行いラジオアイソトープを用いて発現パターンを調べた結果、同様の標識を確認している。得られているDNA断片をラベルし、サザーンハイブリダイゼーションを行ったところ、EcoR1処理したゲノムDNAでは6,500bpに、BamH1では2,500bpに、HindIIIでは2,300bpにそれぞれ一本のバンドが現れ、EH1遺伝子が間違いなくゲノムDNA上に存在することが示された。今のDNA断片が5'末端側であるため、いずれのライブラリーからであってもクローンを拾うことが難しい為、Inverted PCR法をゲノムDNAに応用し、より上流のDNA配列を調べている。上流のexon部分20塩基対の配列が分かれば、RT-PCRにより、より長いcDNAが得られるはずである。現在既にInverted PCRには成功しており、上流の配列を調べつつある。

The axonal projection domain of hippocampus cells is completely consistent, and the molecular markers of hippocampus CA3 and CA1 are detected between two domains and one domain. Subtraction method was used to identify novel cDNA sequences in hippocampal CA3 neurons and neurons in olfactory cortex layer 2, especially in EH1 (Entorhino-Hippocampus specific protein 1). Neurons in the second layer of the olfactory cortex project to the hippocampus, and neurons in the dentate gyrus and CA3 domain form a pathway. EH1 and CA3 are the most likely markers to be formed between neurons in the second layer of the olfactory cortex. In situ, when the child is 18 days old, when the child is born, when the child is older, when the child is older, when the child The DNA fragment was isolated from the genome, and the EcoR1 gene was processed at 6,500bp, BamH1 at 2,500bp, HindIII at 2,300bp, and EH1 at 2,300bp. The DNA fragment is now in the 5'end of the DNA fragment. The DNA sequence is modulated by Inverted PCR. The upstream exon 20 gene pairs were sequenced, RT-PCR was performed, and cDNA was obtained. Now both Inverted PCR is successful, and the upper column is matched.