レーザーマイクロダイセクション法を用いた糸球体内のサイトカインの動態に関する研究

激光显微切割法研究肾小球内细胞因子的动态

• 批准号: 14656125
• 负责人: 代田 欣二
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Azabu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656125/
• 关键词: 腎臓; 糸球体; サイトカイン; マイクロダイセクション; VEGF; flk-1; 抗Thy-1腎炎

実験モデルに見られる腎糸球体病変における様々なサイトカインの関与を検討するために、レーザーマイクロダイセクション(LMD)法が研究ツールとして有用であるかどうか、糸球体局所における遺伝子発現について検討した。まず遺伝子の定量を行う際、LMD法で回収したサンプルから再現性のあるデータが得られるかを確認するため、正常ラット2個体の糸球体200個から得たRNAを用いて、通常のRT-PCR法によりGAPDH、血管内皮増殖因子(VEGF)とその特異的レセプターflk-1について検討した。その結果、2個体のサンプルともに電気泳動にて検索遺伝子の特異的バンドが確認された。これにより、LMD法で回収した組織から抽出したRNAは、遺伝子発現の検討に用いることが可能で、再現性があるデータを得ることができることを確認した。次に、複数の遺伝子発現を定量する場合、安定したデータを得るために必要な糸球体数について検討した。LMD法により正常ラット糸球体を10〜100個回収し、GAPDHとVEGFについてリアルタイムPCR法で検討した。その結果、10個回収したとき、遺伝子の増幅は確認されたものの、一部のサンプルは増幅せず、同一サンプル間にばらつきがみられたが、100個回収した場合は、安定したデータを得ることができたので、100個以上回収して定量実験を行うことにした。さらに、ラットの抗Thy-1腎炎モデルに見られる糸球体病変の寛解とVEGFの関与を検討するため、本モデルの糸球体200個を回収し、遺伝子を定量した。抗体投与3日後のメサンギウム崩壊糸球体において、VEGF mRNA発現量は対照群に比べ少なく、投与後7日の実験群のうち、病変が高度で細胞増殖が著しい個体の糸球体において、その発現量は多いという傾向が認められた。現在、個体数を増やしてさらに詳細に検討するとともに、本モデルの他に抗癌剤誘発糸球体障害モデルにおけるIL-1,IL-6などその他のサイトカインの遺伝子発現についても検討している。

The study of the relationship between kidney disease and kidney disease was carried out by the LMD method, which was used to study the relationship between kidney disease and kidney disease. In addition, the LMD method was used to determine the reproducibility of RNA, and the RT-PCR method was used to determine the specificity of VEGF and flk-1. As a result, 2 samples were identified for electrokinetic detection. The LMD method is used to detect the presence of RNA and to identify the presence of RNA. Second, the number of particles detected in the quantitative situation, stability, and the number of necessary particles detected. The LMD method is used to detect 10 to 100 samples from normal cells, and the GAPDH and VEGF are used to detect the samples from PCR. All results, 10 returns, increase in the amplitude of the receiver, confirmation of the receiver, increase in the amplitude of the amplitude of the receiver, increase in the amplitude of the amplitude of the receiver, increase in the amplitude of the receiver, increase in the amplitude of the amplitude of the receiver, increase in the amplitude of In this study, 200 anti-Thy-1 glomerulonephritis samples were collected and quantified. 3 days after antibody administration, VEGF mRNA expression decreased compared with control group, 7 days after antibody administration, VEGF mRNA expression increased significantly, and VEGF mRNA expression increased significantly in individuals. Now, the number of individuals has increased and detailed studies have been conducted on the development of IL-1,IL-6 and other anti-cancer agents in the study.

项目成果

Kaoru Inoue: "Detection of gene expression of VEGF and flk-1 in the renal glomeruli of the normal rat kidney using the laser microdissection system"Virchows Arch. 442・2. 159-162 (2003)

Kaoru Inoue：“使用激光显微切割系统检测正常大鼠肾小球中 VEGF 和 flk-1 的基因表达” Virchows Arch 442・2 (2003)。