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局所遺伝子導入による移植後動脈硬化症に対する特異的治療法開発

通过局部基因转移开发移植后动脉硬化的特异性治疗方法

基本信息

批准号：
14657320
负责人：
白倉良太
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1:6種類の組み替えアデノウイルスを作成した。PCR法にてマウス脾細胞から、B7.1,B7.2,PD-L1,PD-L2,ICOS ligand cDNAをクローニングし、核酸配列決定からPCRによる人為的変異のないことを確認した。各遺伝子と変異MCP-1遺伝子(7ND)cDNAを非増殖型アデノウイルスに組み込み、各遺伝子を発現する組み替えアデノウイルスを作成した。各ウイルスが目的の遺伝子を強制発現するか否かは、293細胞およびHeLa細胞への感染実験を行い、mRNAと蛋白発現の両者で確認した。2:ラット大動脈移植片に対するex vivoでの遺伝子導入条件を確立した。GFP発現アデノウイルスを用いた検討で、10^<10>〜10^<11>pfu/mlの濃度のアデノウイルス溶液に37℃1時間浸漬することで、ラット大動脈壁実質細胞に遺伝子導入可能であることが明らかとなった。3:我々のこれまでの研究から移植後動脈硬化症に関与すると推定された3つのケモカイン系:MCP1-CCR2、RANTES-CCR5,IP10-CXCR3系の阻害によって本症の分子標的治療が可能か否かを検討するために、抗MCP1抗体または多ケモカイン拮抗活性を持つウイルス産物:vMIP-IIの投与によるラット移植後大動脈硬化症治療実験を行った。その結果、移植4週後の内膜/中膜面積比はisograft群:2.2±0.7%、Allograft群:24.7±6.2%、MCP1抗体群:22.5±7.4%、vMIP-II群:23.9±6.6%であった。当初の目的に添って、組み替えアデノウイルスの作成と局所遺伝子治療条件の設定に成功した。時間及び予算上の制約から、作成した組み替えウイルスによる治療実験を行うには至らなかったが、抗体及び拮抗物質投与によるケモカインを対象とした分子標的治療開発上の若干の知見を得た。

1:6 Types of groups are created. PCR method for spleen cells, B7.1,B7.2,PD-L1, PD-L2,ICOS ligand cDNA sequencing, nucleic acid alignment determination, PCR method for artificial variation and identification. The MCP-1 gene (7ND)cDNA of each gene is not cloned into the genome, and the cDNA of each gene is generated into the genome. Whether or not the targeted genes were forcibly detected in each cell, infection in 293 cells and HeLa cells was carried out, and the detection of mRNA and protein was confirmed. 2: The conditions for gene introduction into the aorta graft were established. GFP was found in a solution of 10^<10>~ 10^<11>pfu/ml at 37℃ for 1 hour, which was possible for the introduction of GFP into plasma cells in the arterial wall. 3. Our research has been conducted on the relationship between post-transplant atherosclerosis and post-transplant atherosclerosis. The three systems:MCP1-CCR2, RANTES-CCR5, IP10-CXCR3, and their molecular target therapies are possible. Anti-MCP 1 antibodies have multiple antagonistic activities. The products:vMIP-II, and their administration and post-transplant atherosclerosis therapy. The results showed that the intima/media area ratio 4 weeks after transplantation was 2.2±0.7% for isograft group, 24.7±6.2% for Allograft group, 22.5±7.4% for MCP1 antibody group, and 23.9±6.6% for vMIP-II group. The initial goal was to create a system for successful setting of treatment conditions. Time and prediction on the restriction, make up the group of drugs, treatment on the implementation of drugs, antibodies and antagonist on the development of drugs, molecular targets on the development of drugs