脳移植を目指した新しい神経幹細胞培養システムの開発

开发用于脑移植的新型神经干细胞培养系统

• 批准号: 14657339
• 负责人: 岩間 亨
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657339/
• 关键词: ES細胞; HGF; 分化; PA6; 神経幹細胞

マウスES細胞をfeeder細胞であるPA6細胞ともに14日間共培養するとES細胞は神経細胞を含む眼様構造物に誘導された。PA6上で分化しているES細胞のコロニーをsingle cellに分離し、fibroblast growth factor-2(FGF-2)(20ng/ml),epidermal growth factor(EGF)(20ng/ml)を含む無血清培養液で7日間の浮遊培養を行うとsingle cellはそれぞれ増殖して神経幹細胞を含む細胞塊(neurosphere)を形成した。このsphere内の細胞は未分化神経細胞のマーカーであるnestinやSOX-1の発現が認められた。PA6細胞上で5日間培養して得られたsphereを分化させると神経、アストロサイト、オリゴデンドロサイトの3方向へ分化することが免疫染色で確認された。本培養法では、効率よくneurosphereを誘導することが可能であると同時に、PA6との共培養の時間を変えることで神経細胞とグリア細胞の比率を変化させることが可能であった。またES細胞由来のneurosphereの形成時に増殖培養液中にHGFを加えることにより、形成されるneurosphereの数が減少したが、neurosphere内には神経細胞がより多く存在した。これはHGFがES細胞由来の神経幹細胞に自己複製よりも神経前駆細胞への分化を促進したためと考えられた。HGFを含んだ培養液内でneurosphereを分化誘導すると神経細胞の比率が増加したことからも分化誘導時においてもHGFは神経への分化促進作用を有していた。脳移植を目指し、ES細胞からの神経幹細胞の誘導とその分化の制御を容易に行える新しい培養法につき研究した。また成果の一部をneuroreportに発表した。

マ ウ ス ES cells を feeder で あ る PA6 cells と も に 14 day trained す る と ES cells は god 経 を containing む others eye structure に induced さ れ た. On PA6, で differentiate, <s:1> て る るES cells, <s:1> コロニ を を をsingle cells に separate, <s:1> fibroblast growth factor-2(FGF-2)(20ng/ml),epidermal growth Factor (EGF) (20 ng/ml) を serum-free culture medium containing む で 7 の floating line cultivate を う と single cell は そ れ ぞ れ raised colonization し て god 経 stem cells contains を む block (neurosphere) を form し た. こ の の within the sphere cells は undifferentiated god 経 の マ ー カ ー で あ る nestin や SOX - 1 の 発 が now recognize め ら れ た. PA6 on cells で 5 day training し て have ら れ た sphere を differentiation さ せ る と 経 god, ア ス ト ロ サ イ ト, オ リ ゴ デ ン ド ロ サ イ ト の へ 3 direction differentiation す る こ と が immune dyeing で confirm さ れ た. This culture method で は, sharper rate よ く neurosphere を induced す る こ と が may で あ る と に, PA6 と の trained の time を - え る こ と で god 経 cells と グ リ の ratio を ア cells - the さ せ る こ と が may で あ っ た. ま た ES cell origin の neurosphere の formed に rights electronic medium, に HGF を plus え る こ と に よ り, forming さ れ る neurosphere の reduced が し た が, neurosphere に は god 経 cells が よ り し more く た. こ れ は HGF が ES cell origin の god 経 に own stem cells reproduce よ り も 駆 cells before god 経 へ の を promote differentiation し た た め と exam え ら れ た. HGF を containing ん だ culture within で neurosphere を induction す る と 経 cells の ratio が god raised plus し た こ と か ら も differentiation induced に お い て も HGF は god 経 へ の differentiation promotes を have し て い た. 脳 transplantation を refers し, ES cells か ら の god 経 stem cells induced と の そ の differentiation の suppression を line easily に え る new し い culture method に つ き research し た. Youdaoplaceholder0 results: a をneuroreportに release: た.

项目成果

Iwama T, Sasaki N, et al.: "Cerebral ischemic complications following intracranial bleeding in patients with moyamoya disease. -These case reports-"Neurol Med-chir. 41. 450-453 (2001)

Iwama T、Sasaki N 等人：“烟雾病患者颅内出血后的脑缺血并发症。-这些病例报告-”Neurol Med-chir。

Ando H, Iwama T, et al.: "Failure of B7.1-modified tumor to evoke full activation of CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes in the central narvous system : prevention of parental turmor growth in the subcutaneous environment"Journal of Neurosurgery. 97. 432-

Ando H、Iwama T 等人：“B7.1 修饰肿瘤未能引起中枢神经系统中 CD8 肿瘤浸润淋巴细胞的完全激活：预防皮下环境中的亲代肿瘤生长”神经外科杂志。

Masaysu Kato. Et al.: "Hepatocyte growth factor promotes neuronal differentiation of neural stem cells derived from embryonic stem cells"neuroreport. Vol15.No1.. 5-8 (2004)

加藤正佑.