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DNAトポアイソメレースを用いた脳腫瘍細胞周期解析と治療への応用の検討

使用 DNA 拓扑异构酶进行脑肿瘤细胞周期分析及治疗应用的考虑

基本信息

批准号：
14657340
负责人：
若林俊彦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAトポアイソメレースIIは、DNA複製に際し、二本鎖DNAの切断と再結合を触媒し、DNAのトポロジーを変換、維持する酵素であり、αとβの2種のアイソザイムが存在する。近年、我々はDNAトポアイソメレースIIαエピトープを認識する抗体を用いた神経系腫瘍に対するDNAトポアイソメレースIIα免疫組織染色法を共同研究(菊池韶彦博士;名古屋大学医学部病態制御研究施設医真菌研究部門教授)にて安定確立し、DNAトポアイソメレースIIαの脳腫瘍悪性度マーカーとしての臨床応用が期待されている。この測定法が確立し臨床応用がなされれば、脳腫瘍の鑑別診断や治療後の経過観察が簡便になる上、組織のDNA修復機構や悪性転化への生着機序の解明にも役立ち、さらに神経系細胞の腫瘍化機序解明の糸口にもなると考えられ、その貢献度は極めて大きいと考えられる。そこで我々は各種の神経系腫瘍におけるDNAトポアイソメレースIIαの発現動態を解明し、神経系細胞の腫瘍化や悪性化に関する詳細な検討をすると共に、更にDNAトポアイソメレースIIa阻害剤が既に臨床の場で使用されている事から、この薬剤を用いた神経系腫瘍への治療の応用も検討した。細胞におけるDNAトポアイソメレースIIα発現の有無を確認するために、免疫組織染色法及びFlowcytometryを用いて検討した。DNAトポアイソメレースIIα陽性細胞として知られるHela cell lineをpositive controlとして、抗DNAトポアイソメレースIIα抗体と反応させた後に、第二抗体としてペルオキシダーゼ標識の抗体を用い、その後基質にて発色させた後に検鏡して、陽性細胞を確認。一方、第二抗体としてFITC標識抗体を用いることで、Flowcytometryにて蛍光光度を横軸に、細胞数を縦軸として各細胞腫のパターンを比較検討した。また各種細胞を同一条件下にて培養し、その増殖率を経時的に生細胞数をトレパンブルー染色にて検鏡し、算定することで比較検討。さらに、DNAトポアイソメレースIIαの発現によって、細胞に対するDNAトポアイソメレースIIα阻害剤の抗腫瘍剤(Etoposid)の影響に変化を認めるかを検討した。

There are two kinds of restriction products, namely, II, DNA replication, DNA cutting and combining with catalyst, DNA sequencing, maintenance of enzyme enzyme, and alpha β. In recent years, we have co-studied the antibodies against II α, and so on, using the method of immuno-tissue staining of II α. Professor, Department of Disease Control, Department of Medical Science, Nagoya University, Dept. of Disease Control, Department of Medical fungal Research, Nagoya University, Nagoya University. By using this method, you can make sure that you need to make sure that you are in a good condition, and that you can make sure that after the treatment, you can check the DNA repair machine, and organize the DNA repair machine to understand the system, the computer, the computer. We are responsible for all kinds of health care systems, such as the DNA system, the information system, the II alpha system, the information system, the control system, the IIa device, the control device, the device, the machine, the machine, The results showed that there were positive DNA markers, immunocytochemical staining and Flowcytometry immunoassay in II α cells. The DNA antibody