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β-TCPとコラーゲンゲルを担体とした軟骨細胞移植による軟骨欠損修復

以β-TCP和胶原凝胶为载体的软骨细胞移植修复软骨缺损

基本信息

批准号：
14657369
负责人：
松田秀一
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

トリリン酸カルシウム(TCP)上で軟骨細胞を培養し、軟骨再生を目的として家兎骨軟骨欠損モデルへの自家軟骨細胞移植を行った。方法としては、日本白色家兎より採取した軟骨細胞を単層培養し、必要な細胞数が得られるまで継代した。得られた細胞は細胞懸濁液にし、アガロースでコートしたマルチプレートに入れ培養し、24時間後には細胞凝集塊を得た。この凝集塊を、αおよびβTCPのディスクを底部に敷いたチャンバー内に入れ培養した。24時間後には凝集塊同士はチャンバーの形状に沿って融合しプラグ状になった。ウサギ大腿膝蓋骨溝に骨軟骨欠損を作成し、チャンバー内で2日間培養した自家細胞由来プラグの移植を行い、1週間ギプス固定をおこなった。術後3週、6週、12週に屠殺し、移植部の組織学的評価をサフラニン0染色、II型コラーゲン免疫染色を用いて行い、マイクロCT(以下MCT)を用いて軟骨下骨レベルでの骨化の状態を評価した。移植後3週では、移植部は肉眼的に軟骨様組織と赤褐色の肉芽組織が混在していた。MCTでは、移植部の軟骨下骨のレベルにおいて、周囲の健常部との連続性をもった骨化が移植部辺縁から中心へ向かうようにみられた。サフラニン0染色で、移植部関節面および軟骨下骨レベルで移植部辺縁の染色が見られた。さらに、軟骨下骨レベルでの肥大軟骨細胞の出現と、血管の進入をみとめた。II型コラーゲンも、サフラニン0と同部位に発現を認めた。6週では、肉眼的に移植部の関節面は全面を軟骨様組織で覆われ、移植細胞レベル全層に渡って周囲との連続性も良好であった。我々が用いた方法では、十分な量の細胞が採取できれば、短期間で移植可能なプラグが作成可能であった。また、移植部に骨膜などの被覆を行わず軟骨様プラグの移植を行ったが、移植組織の脱落も認められず、手技的にも容易に軟骨移植が行えることは本法の利点であると考えられた。

Chondrocyte culture and cartilage regeneration on the surface of cartilage tissue (TCP) were performed for the purpose of bone cartilage damage and autologous chondrocyte transplantation. Methods: Chondrocytes were cultured in layers and the necessary number of cells was obtained. Cell suspension was obtained after 24 hours of culture. The aggregation of α-and β-TCP was observed in the lower part of the cell. After 24 hours, the clumps were mixed together and the shape was changed. The bone cartilage defect in the knee groove of the thigh was created, and the cells were cultured in the middle of the day. The cells were transplanted and fixed in the middle of the week. At 3, 6 and 12 weeks after surgery, histological evaluation of the graft site was performed using immunostaining for type II tumors, and CT(hereinafter referred to as MCT) was used to evaluate the ossification status of the subchondral bone. At 3 weeks after transplantation, the cartilage tissue and auburn granulation tissue were mixed in the transplanted part. MCT, transplantation part of the subchondral bone, Zhou, the normal part of the continuity, the transplantation part of the ossification center to the heart Staining of graft joint surface and subchondral bone was observed. The appearance of hypertrophic chondrocytes in subchondral bone and the entry of blood vessels Type II 6 weeks later, the joint surface of the transplanted part was completely covered with cartilage tissue, and the transplanted cells were completely covered with cartilage tissue. We use the same method, we use a lot of cells, we transplant them in a short time. For example, the graft part is covered with periosteum, and the graft part is covered with cartilage. For example, the graft part is covered with periosteum. For example, the graft part is covered with cartilage. For example, the graft part is covered with periosteum