权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

軟骨細胞移植におけるin vivo electroporationの応用

体内电穿孔技术在软骨细胞移植中的应用

基本信息

批准号：
10877226
负责人：
高田晃平
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Shimane Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の研究を進め、家兎膝関節から分離した軟骨細胞にelectroporationでlacZgeneを導入し、導入後にlacZを発現させることに成功した。ついでTGFβ遺伝子をQinらの方法に準じて、軟骨細胞にBone morphogenetic protein 2,Transforming growth factor β1,basic fibroblast growth factorの導入実験を行った。この際、遺伝子導入の際の至適条件を求めるために、刺激電圧、刺激時間、細胞濃度、細胞浮遊液成分等を検討した。この結果、この至適条件の決定には導入条件によって細胞の生存率や遺伝子の発現率が大きく変化することが分かった。つまり、その条件設定は厳密性を要求するものであったため、現在その実験を繰り返している。TGF β1についてはその導入効率が約5%であった。また、その蛋白発現はELISA法によって、確認できたものの、低く、しかも導入した軟骨細胞の生存率が低いために、移植に有効な細胞s濃度を得ることが困難であることが判明した。これを改善すべく、実験を繰り返している。また、軟骨細胞だけでなく軟骨細胞に分化する間葉系幹細胞への遺伝子導入を現在検討している。これら細胞への導入効率と細胞生存率数をあげるべく導入方法を改善しするとともに、厳密な至適条件を求めている。この至適条件が設定出来次第、in vivoでの軟骨形成・再生への有効性を明らかにし、報告するつもりである。

The previous year's research has been successful in isolating chondrocytes from knee joints and introducing lacZ gene. TGF-beta gene is introduced into chondrocytes, Bone morphogenetic protein 2,Transforming growth factor β1,basic fibroblast growth factor. At this time, the optimal conditions for gene introduction, stimulation voltage, stimulation time, cell concentration, cell suspension composition, etc. were discussed. The results show that the optimal conditions for determining the survival rate of the cells and the occurrence rate of the cells are different from those for introducing conditions. The condition is set to be confidential. The condition is set to be confidential. TGF β1 is introduced at an efficiency of approximately 5%. The protein expression ELISA method was used to confirm the low survival rate of chondrocytes introduced into the tissue and the difficulty in determining the cell concentration after transplantation. This is the first time that I've seen this. Chondrocytes differentiate into mesenchymal stem cells, and the gene transfer process is discussed. The introduction rate and survival rate of the cells were improved. The optimal conditions are set in order, in vivo, cartilage formation and regeneration are effective, and the results are reported.