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内耳感覚細胞再生のための細胞レベルでの機能評価法の確立に関する分子生物学的研究

建立内耳感觉细胞再生细胞水平功能评价方法的分子生物学研究

基本信息

批准号：
14657437
负责人：
工田昌也
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は研究計画に従いモルモットを用い、蝸牛、前庭器を摘出し、一部はそのまま器官培養、一部は単離有毛細胞としin vitroでの実験系を確立した。細胞の静止を迅速に判定するシステムとしては蛍光プローブ(LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit, Molecular Probes)を応用した。その結果、蛍光プローブによる判定と細胞形態による判定はよく相関し、簡便、迅速に細胞の生死を判定することが可能となった。さらに、使用材料に関しては細胞の生死の判定には単離有毛細胞を用いるほうが良好な結果を得ることがわかった。また、細胞機能による評価のために細胞の一酸化窒素、活性酸素種の発生に注目しそれぞれの産生を一酸化窒素はDAF-2DA、活性酸素種はDHTM-Rosを使用して検討した結果、生体内での一酸化窒素、活性酸素種の産生を良好に検出することができた。これらの2種類の蛍光プローブを同時に使用することにより一酸化窒素と活性酸素種の同時検出が可能となり細胞機能の評価ができた。この目的のためには器官培養系を用いるのが良いことも明らかとなった。これらの結果を利用して細胞障害条件の検討を行った結果、アミノ配糖体のゲンタマイシンによる障害が内耳感覚細胞障害モデルとして一般的に応用可能であることが示され、各種抗酸化剤、NOS阻害剤、神経成長因子、HSP誘導剤などにより細胞障害が予防可能であることを明らかにした。これらのin vitroの結果はin vivoでの結果と良く相関し、今回開発したin vitroの実験系が内耳障害の研究に広く応用できることが示された。これらの成果は40th Workshop on Inner Ear Biology、第13回日本耳科学会、第62回日本めまい平衡医学会で発表されると共に6編の論文にまとめられた。

This year's research projects include the establishment of a system for the use of snails, vestibular organs, organ culture, and isolated hairy cells in vitro Cell quiescence is rapidly determined by the use of the LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit, Molecular Probes. The result of the test is that it is easy to determine whether a cell is alive or dead. In addition, the use of materials is related to the determination of cell life and death, and the use of hairy cells is related to good results. In addition, cell function evaluation and production of an acidic hormone and active acid species in cells were noted, and production of an acidic hormone DAF-2DA and active acid species using DHTM-Ros was investigated. These two kinds of light sources can be used simultaneously to evaluate the function of cells. The purpose of this article is to improve the quality of culture. The results of this study are based on the analysis of cell barrier conditions. The results show that various antioxidants, NOS inhibitors, nerve growth factors and HSP inducers can prevent cell barrier effects. The results of this study are in vivo and well correlated, and now they are developed in vitro and in vivo. The results of the 40th Workshop on Inner Ear Biology, the 13th Japanese Academy of Otology, and the 62nd Japanese Academy of Balanced Medicine were published in 6 editions.