歯根膜およびセメント質に特異的に発現する遺伝子のクローニング
牙周膜和牙骨质特异表达基因的克隆
基本信息
- 批准号:14657551
- 负责人:
- 金额:$ 2.18万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 2004
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
レーザーキャプチャー顕微鏡を用いたマイクロダイセクションシステムは、顕微鏡観察下において組織切片から単一の標的細胞集団のみを正確に採取して、その標的細胞からRNAの抽出を可能にした画期的なシステムである。そして、その正確に分離・採取された各細胞集団から得られたRNAを比較解析すれば、それぞれに特異的なマーカーを同定することも可能だと考えられる。当初予定していた、パラフィン切片から抽出したRNAは損傷が大きく、今回用いるマイクロアレイによる遺伝子配列の解析には適さないことがわかってきたため、RNAを凍結切片から抽出する方法に変更したが、周知のように硬組織の非脱灰凍結切片の作製が想像以上に困難であった。この問題をクリアするために試行錯誤した結果、特殊なブレードとフィルムおよびUV照射を使った方法により、LCMに応用できる非脱灰凍結切片の作製が可能となった。これまでに、これらの非脱灰凍結切片からは、18Sおよび28Sのピークが明瞭な良質のRNAが採取できることがバイオアナライザーを用いた解析により明らかとなった。現在microarrayの過程にあるが、採取した細胞から抽出したRNAを、増幅しPCR解析を行った結果、GAPDH、オステオカルシン、1型コラーゲン、ボーンシアロプロテイン、BMP-2などの発現を示す明瞭なバンドが確認され、この方法の信頼性が確認された。
Microscopic examination of tissue sections from a single target cell collection is performed correctly, and RNA extraction from a single target cell is possible. For example, if you want to use the correct isolation method, you can compare the RNA of each cell set and determine the identity of each cell. It is difficult to imagine how to extract RNA from frozen sections of hard tissues when the RNA is extracted from frozen sections. This problem is caused by trial errors, special conditions, UV irradiation, LCM application, and the possibility of making non-deashed frozen sections. This is the first time that a non-demineralized frozen section has been prepared. The results of PCR analysis, GAPDH, DNA sequence, type 1 cDNA sequence, BMP-2 sequence and the detection of RNA in the microarray process were shown to confirm the reliability of the method.
项目成果
期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
近藤 尚知: "Distinct roles for activation of multiple G proteins by the PTH/PTHrP receptor in vivo"Developmental Cell. 3. 183-194 (2002)
Naotomo Kondo:“体内 PTH/PTHrP 受体激活多种 G 蛋白的不同作用”发育细胞。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
近藤 尚知: "Cyclic AMP/PKA mediates PTH/PTH-rP receptor regulation of osteoclastogenesis and expression of RANKL and OPG mRNAs by marrow stromal cells"Journal of Bone and Mineral Research. 17(9). 1667-1679 (2002)
Naotomo Kondo:“环状 AMP/PKA 介导 PTH/PTH-rP 受体对骨髓基质细胞破骨细胞生成和 RANKL 和 OPG mRNA 表达的调节”《骨与矿物质研究杂志》17(9) (2002)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
T Damrongrungruang, H Kondo, S kasugai, et al.: "Application of Laser Capture Microdissection on Cementum."Journal of Dental Research. (in press). (2004)
T Damrongrungruang、H Kondo、S kasugai 等人:“激光捕获显微切割在牙骨质上的应用”。《牙科研究杂志》。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
A New Technique Using Calcium Phosphate Precipitate Enhances Efficiency of In Vivo Plasmid DNA Gene Transfer
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- DOI:
- 发表时间:2004
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:S.KURODA;H.KONDO;S.KASUGAI;et al.
- 通讯作者:et al.
Kuroda S, H Kondo, S kasugai, et al.: "Bone mineral density of the mandible in ovariectomized rats : analyses using dual energy X-ray absorptiometry and peripheral quantitative computed tomography."Oral Diseases. 9. 24-28 (2003)
Kuroda S、H Kondo、S kasugai 等人:“卵巢切除大鼠下颌骨的骨矿物质密度:使用双能 X 射线吸收测定法和外周定量计算机断层扫描进行分析。”口腔疾病。
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