培養系を用いた椎間板髄核移植に関する実験的研究

培养系统椎间盘髓核移植的实验研究

• 批准号: 62480315
• 负责人: 渡部 恒夫
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 1989
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-62480315/
• 关键词: 椎間板細胞; コラーゲンゲル内培養; 再構成椎間板; 髄核移植

1)椎間板細胞培養法の確立一以下の方法により安定した培養が可能であった. すなわち幼若家兎椎間板を材料として用い, 線維輪部は0.2%コラゲナーゼ/10%FCS加HamFー12倍地中で約5時間, 髄核部は0.2%トリプシン0.1%EDTA/CMFーTyrods液中で約20分間stivvingすることにより細胞を単離した. これをファルコン24穴ディッシュに1×10^5cells/wellの密度で播種し30%FCS加HamF12培地中で培養した. 2)培養椎間板細胞の性状分析ー線維輪細胞はpH4.1トルイジンブルー染色で異染性を呈し, 分化機能維持能力, 再生能力を有する典型的な軟骨細胞が主体であった. 髄核細胞は空胞を持つ大型の細胞が主体を占め, 電顕による観察で特有なinter cell ular junctionを有することから脊索細胞であると考えられた. 次に合成するプロテオグリカンへの^<35>Sの取り込みを調べると線維輪細胞では25,112±2969cpm/wellと高値を示したのに対し髄核細胞では2655±169cpm/wellであった. 以上のことより再構成椎間板の作成に適した細胞は線維輪細胞であると考えられた. しかし問題点として線維輪細胞の単層培養系では初期では軟骨様の性質を示すものの, 如々に線維芽細胞様の形態を示す細胞が優位に立つ傾向があった. 3)コラーゲンゲル内培養法による再構成椎間板の作成ー上記の問題点を克服するためコラーゲンゲルを用いた3次元的培養法が有効であった. 線維輪細胞を同様の方法で単離し1×10^6cells/wellの密度でコラーゲンゲル(新田ゼラテン製cell matrix typeIA)に包埋して培養した. 線維輪細胞は脱分化がおさえられSPSーPAGEによるコラーゲン分析では軟骨特有のII型が確認され, 軟骨細胞としての機能を維持することが可能であった. すなわち本来の椎間板に類似した機能を発揮していると考えられた. 今後はこの再構成椎間板を髄核移植に用いる実験を進めたいと考えております.

1) intervertebral disk cell culture method の establish a following の に よ り settle し た cultivate が may で あ っ た. す な わ ち if young home 兎 intervertebral disk を material と し て in い, round line d department は 0.2% コ ラ ゲ ナ ー ゼ / 10% FCS plus HamF ー 12 times で about 5 in time, Marrow core は 0.2% ト リ プ シ ン 0.1% EDTA/CMF ー Tyrods fluid between で about 20 points in stivving す る こ と に よ り cells を 単 from し た. こ れ を フ ァ ル コ ン 24 hole デ ィ ッ シ ュ に 1 x 10 ^ 5 cells/well の で seeding density し 30% FCS plus HamF12 で cultivation in the petty し た. 2) develop intervertebral disk cells の character analysis ー line d round は pH4.1 ト ル イ ジ ン ブ ル ー dyeing で metachromatic sex を し, differentiation function maintenance capacity, The regenerative capacity を has a する typical な chondrocyte が main body であった. Marrow nuclear cells は empty cell を hold large つ の が subject を め, electric 顕 に よ る 観 examine で な unique system cell ular junction を have す る こ と か ら notochord cells で あ る と exam え ら れ た. Time に synthetic す る プ ロ テ オ グ リ カ ン へ の ^ < > 35 S の take り 込 み を adjustable べ る と line d round cells で は 25112 + 2969 CPM/well と high numerical を shown し た の に し seaborne marrow nuclear cell で は 2655 + 169 CPM/well で あ っ た. Above の こ と よ り reconstitution intervertebral disk の made に optimum し た cells は line d round で あ る と exam え ら れ た. し か し problem point と し て line d round cells の 単 layer culture system で は early で は cartilage others の nature を shown す も の の, Such as 々 に line d bud cells others の form を す cells が primacy に made つ tendency が あ っ た. 3) コ ラ ー ゲ ン ゲ ル culture method in に よ る reconstitution intervertebral disk の made ー written の problem を overcome す る た め コ ラ ー ゲ ン ゲ ル を with い た culture method of three dimensional が have sharper で あ っ た. Line を d round cells with others の way で 単 from 1 x 10 ^ 6 cells/well し の density で コ ラ ー ゲ ン ゲ ル (SAN tin ゼ ラ テ ン system cell matrix typeIA) に embedding し て cultivate し た. は line d round cell dedifferentiation が お さ え ら れ SPS ー PAGE に よ る コ ラ ー ゲ ン analysis で は cartilage の special type II が confirm さ れ, chondrocytes と し て の function を maintain す る こ と が may で あ っ た. す な わ ち originally の intervertebral disk に similar し た function を 発 swing し て い る と exam え ら れ た. In the future, the re-formation of the intervertebral plate by <s:1> <s:1> <s:1> will be reconstructed, and the を pulp nuclear transplantation に will be examined by <s:1> る laboratory を to めた と と と えてお えてお ます.

项目成果

山崎正志;渡部恒夫 他: 関東整形災害外科学会誌.

Masashi Yamazaki；Tsuneo Watanabe 等：关东整形外科学会杂志。