脂肪酸不飽和化酵素の活性制御

脂肪酸去饱和酶活性的调节

• 批准号: 04640618
• 负责人: 福永 典之
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640618/
• 关键词: 脂肪酸不飽和化酵素; 低温適応; 好冷菌; 不飽和脂肪酸; イソクエン酸脱水素酵素; 遺伝子塩基配列; 低温誘導発現

1.in vitro脂肪酸不飽和化酵素活性測定系嫌気・好気両経路の不飽和脂肪酸合成経路が共存する耐冷菌シュードモナス-E-3株における両経路の役割を理解するため、in vitro不飽和化酵素活性測定系を検討した。酵素は膜画分に局在し、基質として飽和アシル-CoAを利用、至適pHは7.0であった。しかし、膜画分の酵素は極めて不安定で、各種安定剤(牛血清アルブミン、各種塩等)の添加によっても安定化されなかった。細胞質画分より脂肪酸合成酵素を部分精製し、嫌気経路を阻害剤(DAC)でブロックした系に、膜画分を加えて反応させると不飽和脂肪酸が生成された。100℃熱処理した膜画分にはこの活性は認められず、また不飽和脂肪酸要求株の膜画分の活性は著しく低下していた。この結果は、膜画分の不飽和化酵素活性がin vitroで測定できることを示すものである。2.酸素の低温誘導発現好冷菌Vibrio ABF-1株のイソクエン酸脱水素酵素(IDH)には、常温菌型の熱安定性を持つIDH-Iと、熱に極めて不安定な低温適応型IDH-IIのアイソザイムが存在する。また両者は構造的にも免疫学的にも異なっている。両アイソザイムの生理的役割を調べる目的で、アミノ末端アミノ酸配列を基にして調製した合成オリゴヌクレオチドをプローブとして遺伝子をクローニングし、翻訳領域を含む塩基配列を決定した。クローニングした遺伝子の大腸菌内での発現様式を調べると、IDH-II遺伝子の発現は37℃では起らず、15℃に温度を低下させた時に発現された。

1.in The vitro fatty acid unsaturated enzyme activity assay system was developed to understand the regulation of the unsaturated fatty acid synthesis pathway in the psychrotrophic bacteria strain E-3. Enzymes play an important role in membrane separation, utilize substrates and saturate Aristoil-CoA, and have an optimal pH of 7.0. The enzyme of membrane composition is extremely unstable, and the addition of various stabilizers (bovine serum, various impurities, etc.) Cytoplasmic fatty acid synthase is partially purified, and the pathway inhibitor (DAC) is used to increase the production of unsaturated fatty acids. Heat treatment at 100℃ reduces the activity of membrane components, while unsaturated fatty acids require low activity of membrane components. The results showed that the activity of unsaturated enzymes in membrane fractions was measured in vitro. 2. The enzyme IDH of Vibrio ABF-1 strain is stable to heat and stable to low temperature, IDH-II is stable to low temperature. It is not the same as the structure of the immune system. For the purpose of physiological regulation, the terminal acid sequence is modulated, and the terminal acid sequence is determined. The development of IDH-II gene in Escherichia coli was regulated at 37℃ and 15℃.

项目成果

N.Fukunaga et al.: "Purification and characterization of monomeric isocitrate dehydrogenase with NADP-specificity from Vibrio parahaemolyticus Y-4" J.Biochemistry. 112. 849-855 (1992)

N.Fukunaga 等人：“副溶血弧菌 Y-4 中具有 NADP 特异性的单体异柠檬酸脱氢酶的纯化和表征”J.Biochemistry。