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バチルス属細菌の高分子型・低等電点型の新規セリンプロテアーゼの研究

芽孢杆菌新型高分子量、低等电点丝氨酸蛋白酶的研究

基本信息

批准号：
04660075
负责人：
一島英治
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はネパールの伝統的発酵食品キネマより分離したビオチン要求性細菌が、從来既報のBacillus属の生産するセリンプロテアーゼとは分子量、等電点の大幅に異る新規のセリンプロテアーゼを生産することを発見したことにはじまる。1.生産菌の分離同定: ネパールのキネマより分離したプロテアーゼ生産菌No.16を同定したところ、対照株である納豆菌Bacillus subtilis(natto)と同様の性質を示すことからBacillus subtiles(natto)と同定された。2.酵素の分子特性: 分離菌を培養すると分子量約28,000、等電点8.7のスブチリシンNATと同様なセリンプロテアーゼの外に、分子量はHPLCで88,000、SDS-PAGEで約90,000、等電点は3.9のセリンプロテアーゼを生産した。從来の知見からはbacillopepかdase Fは分子量50,000あるいは33,000で多少近い。精製酵素の比活性は0.034katal/kg・タンパク質でミルクカゼインに対する最適pHは10.0である。本酵素の内部構造の25残基のアミノ酸配列はbacillopeptidase FのN末端と相同性があった。3.基質特異性: 過ギ酸酸化インスリンB鎖に対する特異性は、pH7.5でTyr^<16>-Leu^<17>を最も良く分解し、さらにCgSO_3H^7-Gly^8、Val^<12>-Glu^<13>、Phe^<25>-Tyr^<26>の各ペプチド結合を加水分解するものであった。この酵素の特異性は從来から知られたスブチリシン・ファミリーのセリンプロテアーゼの特異性とは全く異るものであることを明かにした。本酵素はスブチリシン・ファミリーを特異的に阻害する低分子の阻害剤PMSF、キモスタチンには阻害されたが、タンパク性阻害剤であるStreptonyces subtilisin inhibitorによっては全く阻害されない特性を示した。

This study was conducted to investigate the molecular weight and isoelectric point of Bacillus spp. 1. Isolation and identification of the producer strain: Bacillus subtilis(natto) and Bacillus subtilis(natto). 2. Molecular properties of the enzyme: molecular weight of the isolated strain is about 28,000, isoelectric point 8.7, molecular weight of NAT and isoelectric point 88,000, molecular weight of SDS PAGE is about 90,000, isoelectric point 3.9, molecular weight of NAT and isoelectric point 88,000. We have always known that the molecular weight of F is 50,000 and 33,000. The specific activity of the purified enzyme was 0.034 katal/kg. The optimum pH was 10.0. The internal structure of this enzyme consists of 25 amino acid residues and the N-terminal sequence of bacillopeptidase F. 3. Matrix specificity: The specificity of the enzyme is the best for the hydrolysis of Tyr^ -Leu^at pH 7.5<16>, and the specificity for the hydrolysis of <17>CgSO_3H_7-Gly_8, Val^<12>-Glu^<13>, Phe^<25>-Tyr^<26>. The specificity of this enzyme has always been different. The enzyme has the properties of a low molecular weight inhibitor PMSF and a high molecular weight inhibitor.