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鶏卵の新しいDNA分解酵素の研究

新型鸡蛋 DNA 降解酶的研究

基本信息

批准号：
01560085
负责人：
一島英治
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560085/
关键词：
デオキシリボヌクレア-ゼ DNase DNaseEy 鶏卵卵黄グラニュ-ルニワトリ

项目摘要

本研究は鶏卵卵黄中にデオキシリボ核酸分解酵素活性(DNase)を発見したことにはじまる。DNase活性は卵黄のプラズマ画分とグラニュ-ル画分に存在した。プラズマ画分の活性は精製操作で失活し易っかった。グラニュ-ル画分を3%食塩処理により可溶化し、次いでエ-テル処理による水層画分中に存在するDNaseをDEAE-Toyopearl,Sephairgl S-200、ヒドロキシアパタイト、DNA-celluloseの各クロマトグラフィ-により精製した。ヒドロキシアパタイト段階で約3,300倍に精製した。最終の段階で非活性は約1/10に減少した。本DNaseの分子量は33,000で、dsCCDNAに最適pH7.0付近で作用しOC、次いでL-DNAへと変換した。キレイト試薬によりアポ酵素となり失活した。Mg^<2+>あるいはCa^<2+>の添加で活性は回復した。Mn^<2+>あるいはCo^<2+>の添加によっても一部の活性は回復した。本酵素によるホスホジェステル結合の切断後、5'-ヌクレオチダ-ゼあるいは3'-ヌクレオチダ-ゼを作用させて無機リン酸の遊離をみたところ、5'-ヌクレオチダ-ゼによる遊離リン酸が明らかに多かった。以上の結果、本DNaseは生成物に5'リン酸,3'-OHを与えることが明かとなった。さらに、本酵素の塩基特異性について、5'-末端標識法で検討した。本酵素により生成したオリゴヌクレオチドにアルカリホスファタ-ゼを作用させ、次いで〔γ-^<32>P〕ATPを用いT4ポリヌクレオチドキナ-ゼにより、5'-OHに^<32>Pを転移標識した。ヌクレア-ゼP_1消化の結果、dCMP,dTMPが得られdGMPは全く得られなかった。以上の結果、本DNaseはピリミジン塩基特異的であることが明かとなった。本DNaseの季節変動を調べたところ、7月に活性が最高になることが明かとなった。本酵素は抗ウイルス性の生体防御酵素であることが強く示唆された。以上の結果、鶏卵卵黄中のDNaseは従来知られなかった新規のピリミジン塩基特異的な5'-リン酸を生成するDNaseでDNaseEyと命名された。

In this study, the activity of nucleolytic enzyme (DNase) in egg yolk was detected. DNase activity is present in egg yolk. It is easy to deactivate the active components in the purification operation. The DNase DEAE-Toyopearl, Sepairgl S-200, DNA-Cellulose and DNA-Cellulose are all present in the aqueous phase of the aqueous phase. It is approximately 3,300 times more refined than the original version. The final stage of inactivity decreases by about 1/10. The molecular weight of this DNase is 33,000, and the optimum pH for dsCCDNA is 7.0. The enzyme is inactivated. Mg^<2+>, Ca^<2+>, Ca^<2+>, Ca ^<2 + Mn^<2+>, Co^<2+>, Co^<2+>, Co ^<2 + The enzyme is a 5-amino-3-amino-5-amino-3-amino-5-amino-amino-5-amino-5-amino-amino-5-amino-5-amino-5- As a result, this DNase product is 5'-hydroxy and 3'-OH. In addition, the enzyme's base specificity is detected by 5'-terminal labeling. This <32>enzyme is produced in the presence of T4, 5-OH, 5-P, 5-OH, 5-OH, 5-<32>OH DCMP,dTMP were obtained from the results of digestion. The above results, this DNase is very specific. The season of this DNase changes, and July is the highest. This enzyme is resistant to sex and biological defense enzymes. As a result, the DNase in egg yolk was named after the new DNase.