アフリカツメガエル予定外胚葉における周質誘導の伝達速度

非洲爪蟾假定外胚层周质诱导的传播率

• 批准号: 04670023
• 负责人: 栗原 一茂
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670023/
• 关键词: Xenopus; neural tissue; homoiogenetic induction; cell-cell interaction; monoclonal antibody

ツメガエル胚神経組織の特異的マーカーを検索・作製する事が本研究の第一の目的であった。マーカーとして市販の抗ニューロフィラメント・抗MBP・抗FGAPを用い免疫組織化学を行った。これらの抗体はその抗原の発現時期が遅い事、組織の一部としか反応せず全体的でない事等本研究遂行に不適切であった。有効なマーカーを得るため抗原としてツメガエル胚(st.48)の脳と脊髄をBalb/cに脾内注入した。 その後3回腹腔内に追加免疫を行い最終免疫3日後、ポリエチレングリコールを用いた通常の方法で脾リンパ球とミエローマを細胞融合させ、96ウェルのプレート2枚でHAT選択を行った。 その結果、全てのウェルにコロニーを認め、ELISA法によりそのうち26ウェルが陽性である事を確認した。免疫組織化学よりそのうち一つのウェルが興味深い抗体を産生していた。この抗体の特性は(1)カルノア固定後通常のパラフィン切片法でも胚の神経組織(CNS+PNS)の特異的マーカーとなり得る。(2)初期神経胚の神経域で発現している抗原と反応する。確認できている段階では神経管はもちろん神経板も陽性である。(3)ほぼ神経組織全体と反応する。以上の様にこの抗体は従来のものより有利な点を持っており、今後の誘導刺激の伝達速度の実測は非常に容易になったと考えられる。反面困難な点もあって、この抗体を産生するハイブリドーマはかなり不安定でクローニング中に抗体産生をやめる場合があり、完全に確立された状態ではない。現時点で4回クローニングを行っている。クローニングを繰り返すにつれ陰性になるクローンの比率は小さくなって来ており確実に安定化の傾向にあるが、生じるクローンの全てが陽性になる必要がある。この様に現在ハイブリドーマの確立を行っている状況である。補助金はハイブリドーマ作製・免疫組織化学・ELISA・抗体の購入に使用された。

This is the first purpose of this study. Anti-MBP and anti-FGAP antibodies were detected by immunocytochemistry. The purpose of this study was to investigate the current situation of antibody antigens, and to organize a group of antigens to respond to all the events in this study. The spleen was injected with antigens (st.48), spinal cord (Balb/c), and spleen. After three rounds of intraperitoneal supplementary immunization, three days later, the mice were immunized for 3 days, and the usual method was used to determine the spleen, the spleen, the ball, the cell fusion, and the 96-cell fusion. Two HAT were selected. The results show that all of the results are correct, and that the ELISA method does not require any confirmation. The immunohisto-chemical method was used to detect the presence of antibodies. The characteristics of the antibody (1) after fixation, it is usually necessary to detect the specificity of the embryo tissue (CNS+PNS) by slicing. (2) in the early stage, the antigens were detected in the early stage. Make sure that you don't know if you're in charge of sex. (3) the God of God organized the whole body to counter-attack. The above antibody tests are very easy to achieve in the future, and it is very easy to test the speed of arrival in the future. On the reverse side, the antibody is not stable, and the antibody is not stable. At the same time, 4 times later, please contact me again and again. Please tell me that the ratio is small and that it is necessary to make sure that it is stabilized and that it is necessary. Please do not know if you are in a position to make sure that you are not in a position to do so. The immuno-histochemical ELISA antibody was introduced into the immuno-histochemistry and used in the laboratory.