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リーシュマニア原虫を同定する最新の技術の特性検討と同定基準確立

利什曼原虫最新鉴定技术的表征及鉴定标准的建立

基本信息

批准号：
04670230
负责人：
三森龍之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リーシュマニア原虫株の分類同定法として単クローン抗体、アイソエンザイムおよびキネトプラスト(k)DNAによる手法を組み合わせて用い、総合的に検討を加え、同定法の標準化を計かるとともに、より正確な種の分類を試みた。用いた原虫株は、エクアドル国で分離された40株(ヒトの皮膚潰瘍病変から33株、保虫動物から6株およびサシチョウバエから1株)とWHOリファレンス株を用いた。原虫は、シュナイダー培地にてプロマスティゴート型虫体を培養して用いた。kDNA分析はミトコンドリアが多く含まれるキネトプラストから、ネットワークDNAを抽出し制限酵素(Mspl,Rsal,Hinfl,Alul,Mbol,Taql)で切断し4.5%〜10%のポリアクリルアミドグラディエントゲルにて電気泳動を行ない、エチジウムブロマイドもしくは、硝酸銀にて染色し、制限酵素切断パターンを調べた。また、単クローン抗体およびアイソエンザイムの電気泳動パターンについても検索を試みた。その結果、アイソエンザイム、単クローン抗体およびkDNAの分析結果は、非常に相関の高いものであった。現在、リーシュマニアの種の同定は、基本的にはアイソエンザイムを用いているが、単クローン抗体やkDNA単独でも十分同定できるだけの信頼性があるものと考えられる。さらにこれらの方法は、アイソエンザイムで区別できなかった差まで観察することができ、新種の記載などには、重要な役割をはたすものである。これらの結果からエクアドル国のリーシュマニア原虫株はヒトから、Leishmania panamensis,L.mexicana,L.major-like,L.braziliensis、野生動物からL.amazonensis,L.mexicana、新種のL.equatorensis、サシチョウバエからL.mexicanaが分離株として同定された。これらの株は、ヒトの皮膚潰瘍における病型や、地理的分布との関連性が強く、興味ある所見であった。

The classification and identification method of different strains of protozoa, including antibody, protein and gene (k)DNA, is used in the combination of methods, and the standardization of identification method is used to test the classification of correct species. 40 strains were isolated from China (33 strains from skin ulcer disease, 6 strains from zooprotectant and 1 strain from zooprotectant) and WHO strains were used. The protozoan is cultured in the medium. kDNA analysis: DNA restriction enzymes (Mspl,Rsal,Hinfl,Alul,Mbol,Taql) are isolated from the DNA by 4.5% to 10% of the total DNA. For example, if you want to test the antibody, you can test the electrokinetic parameters of the antibody. The results of the analysis of the antibody and kDNA are very relevant. Now, we have the same identity, the same identity. The method of identification, identification. The results of this study include: Leishmania panamensis, L.mexicana, L.major-like,L.braziliensis,L.amazonensis,L.mexicana,L. equatoresis, L.mexicana, L. equatoresis,L.mexicana,L.mexicana,L. equatoresis, L.mexicana. The disease type, geographical distribution and correlation of the disease are strong and interesting.